[发明专利]一种用于RNA提取的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种RNA提取试剂盒，其特征在于：它包含以下试剂组分：焦磷酸二乙酯、无菌双蒸水、异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、β-巯基乙醇、NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇、乙醇、甘油和山梨醇。

2.一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于它包括以下步骤：步骤一，取一定量的组织，依次加入聚乙烯吡咯烷酮、巯基乙醇、液氮充分研磨成粉末后加入提取缓冲液，充分混匀；步骤二，依次加入NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇，振荡混匀后进行冰浴、离心；步骤三，取上清，加入等体积酚/氯仿/异戊醇，充分混匀后进行冰浴、离心；步骤四，取上清，加入氯仿/异戊醇，再抽提一次；步骤五，取上清加入NaAC，混匀，加入等体积异丙醇混匀，-20℃放置；步骤六，将混合液至于离心机离心，弃上清，用乙醇清洗沉淀，两次，室温风干；步骤七，加入一定体积的焦磷酸二乙酯水，溶解沉淀，-80℃保存。

3.根据权利要求1所述的一种RNA提取试剂盒，其特征在于：所述的异硫氰酸胍、NaAC、甘油、山梨醇浓度分别为3-4.5M、1.5-2.5M、0.001-0.010％V/V、0.8-1.5M/L，NaAC的PH值在3.5-4.5之间，乙醇由75％的无水乙醇现用现配，焦磷酸二乙酯用于制备无RNase的双蒸水，无RNase的双蒸水用于配制试剂。

4.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤一中加入聚乙烯吡咯烷酮的体积为1-2ml，加入疏基乙醇的体积为0.005-0.15ml，加入液氮充分研磨成粉末后加入提取缓冲液的体积为1-6ml，1g组织对应缓冲液体积为10ml。

5.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤二中依次加入NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇的体积为100ul、0.3-0.6ml、100ul，NaAC浓度为1.8-2.3M，PH为3.5-4.3，冰浴条件为5min，4℃，离心条件为12000r/min，10min。

6.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤三中加入酚、氯仿和异戊醇的比例为25：24：1，冰浴条件为5min，4℃，离心条件为12000r/min，10min。

7.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤四中加入氯仿和异戊醇的比例为24：1。

8.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤五中加入的NaAC条件为体积为1/10，浓度为2.8-3.2M，PH为5.1-5.3，放置条件为-20℃，40min-60min。

9.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤六中的离心条件为4℃，13500r/min，离心25min，乙醇浓度为75％。

10.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤七中在焦磷酸二乙酯水中加入1mol/L的山梨醇。