[发明专利]抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物

说明书

本发明公开了抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物，所述内皮抑素的氨基酸序列用SEQ ID NO.4所示；内皮抑素的氨基酸序列的Arg62Arg63其中一个Arg发生点突变。本发明的抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物在体内稳定，半衰期长、抗肿瘤生物活性高。

本申请是申请号为201510761800.X的分案申请，申请日2015年11月10日，发明创造名称：抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物及应用。

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物及应用，属于生物医药抗肿瘤药物领域。

背景技术

肿瘤生长依赖血管的形成，而血管的形成又受到血管生长因子和抑制因子的调节，抑制肿瘤血管的生长是治疗肿瘤的有效方法。内皮抑素(Endostatin)具有抑制血管生成的功能，所以在肿瘤的抗新生血管治疗中受到了重视。内皮抑素是胶原蛋白XVIII的水解而产生的C端184个氨基酸片断，它能有效抑制多种不同种类肿瘤，生物学作用呈广谱性，也无耐药性，是迄今发现的最好的血管生成抑制因子(Exp Cell Res,312,594-607,2006)。

但是，在猴子实验和人的临床试验中发现内皮抑素的半衰期很短，呈现指数级降解，10小时前后内皮抑素的体内含量递减百倍甚至接近为零(Acta Pharmacol Sin,26,124-128,2005；J Clin Oncol,20,3792-3803,2002)，表明它在动物体内很不稳定，这将大大影响内皮抑素的抗肿瘤治疗效果。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供半衰期长、抗肿瘤生物活性高的抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物。

本发明的第二个目的是提供抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物在制备抗癌药物的应用。

本发明的第三个目的是提供编码上述内皮抑素的衍生物的DNA片断在制备抗肿瘤药物的应用。

一种抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物，所述内皮抑素的氨基酸序列用SEQ.ID.NO4所示；所述衍生物包括：内皮抑素与抗体IgG不变区连接；或在内皮抑素的N端前面引入Arg；或在内皮抑素的N端前面、或C端后面、或N端前面和C端后面引入糖基化位点的氨基酸短肽；或内皮抑素的氨基酸序列的Arg62Arg63其中一个Arg发生点突变、或Arg128Arg129其中一个Arg发生点突变、或Arg62Arg63其中一个Arg发生点突变的同时Arg128Arg129其中一个Arg发生点突变。或内皮抑素与抗体IgG不变区连接，在内皮抑素的N端前面引入Arg，在内皮抑素的N端前面、或C端后面、或N端前面和C端后面引入糖基化位点的氨基酸短肽，内皮抑素的氨基酸序列的Arg62Arg63其中一个Arg发生点突变、或Arg128Arg129其中一个Arg发生点突变、或Arg62Arg63其中一个Arg发生点突变的同时Arg128Arg129其中一个Arg发生点突变。

IgG不变区为CH1、CH1CH2或CH1CH2CH3，所述内皮抑素与CH1连接的氨基酸序列为SEQ.ID.NO8；所述内皮抑素与CH1 CH2连接的氨基酸序列为SEQ.ID.NO10；内皮抑素与CH1CH2CH3连接的氨基酸序列为SEQ.ID.NO12。

内皮抑素的N端前面引入Arg为在内皮抑素的N端前面连接一个短肽，所述短肽中含有一个以上的Arg。

糖基化位点为Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中X为其它氨基酸。

Arg发生点突变为His。

抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物的氨基酸序列最好是SEQ.ID.NO20所示。

编码权利要求6所述的抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物的核酸序列是SEQ.ID.NO19所示。

上述抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物在制备抗癌药物的应用。