[发明专利]毕赤酵母翻译相关因子Bcy1在外源蛋白表达中的应用

权利要求书

1.一种毕赤酵母翻译相关因子Bcy1在外源蛋白表达中的应用，其特征在于：是将毕赤酵母翻译相关因子Bcy1表达于毕赤酵母外源蛋白表达工程菌株，具体通过如下步骤实现：

（1）以载体pPICZA为模板，以SEQ ID No.9和SEQ ID No.10为引物进行PCR扩增，得到pPICZA线性片段；然后将pPICZA线性片段与毕赤酵母翻译相关因子Bcy1进行同源重组，得到重组载体pPICZA-Bcy1；

（2）将重组载体pPICZA-Bcy1转化至大肠杆菌感受态中，用含Zeocin的培养基进行筛选，再提取质粒转化至毕赤酵母外源蛋白表达工程菌株中，得到重组表达工程菌；

所述的毕赤酵母翻译相关因子Bcy1为蛋白激酶A调节亚基，其氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示；

所述的外源蛋白为增强型绿色荧光蛋白和植酸酶中的一种。

2.根据权利要求1所述的毕赤酵母翻译相关因子Bcy1在外源蛋白表达中的应用，其特征在于：

编码所述毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述的毕赤酵母翻译相关因子Bcy1在外源蛋白表达中的应用，其特征在于：

步骤（2）中所述的毕赤酵母外源蛋白表达工程菌株为能够表达外源蛋白增强型绿色荧光蛋白或植酸酶的毕赤酵母外源蛋白表达工程菌株。

4.根据权利要求1所述的毕赤酵母翻译相关因子Bcy1在外源蛋白表达中的应用，其特征在于：在步骤（2）之后还包括诱导表达的步骤；具体为：

将重组表达工程菌接种到培养基中培养至OD600为2.0～6.0，然后转至含有甲醇的诱导培养基中进行诱导表达，得到所述的外源蛋白；

所述的培养基为BMGY培养基，其组成成分为：1%（v/v）甘油，2%（w/v）蛋白胨，1%（w/v）酵母提取物，1.34%（w/v）酵母氮源，100 mM pH6.0磷酸钾缓冲液；

所述的培养基中培养的条件为：30℃震荡培养16～20小时；

所述的诱导培养基为BMMY培养基，其组成成分为：1%（v/v）甲醇，2%（w/v）蛋白胨，1%（w/v）酵母提取物，1.34%（w/v）酵母氮源，100 mM pH6.0磷酸钾缓冲液；

所述的诱导表达的条件为：在30℃下诱导表达24～120小时。

5.含有毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的重组载体或重组表达工程菌在外源蛋白表达中的应用，其特征在于：

所述的毕赤酵母翻译相关因子Bcy1为蛋白激酶A调节亚基，其氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示；

所述的外源蛋白为增强型绿色荧光蛋白和植酸酶中的一种；

所述的含有毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的重组载体为将毕赤酵母翻译相关因子Bcy1连接到载体pPICZA获得；具体为：以载体pPICZA为模板，以SEQ ID No.9和SEQ ID No.10为引物进行PCR扩增，得到pPICZA线性片段；然后将pPICZA线性片段与毕赤酵母翻译相关因子Bcy1进行同源重组，得到含有毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的重组载体；

所述的含有毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的重组表达工程菌为将含有毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的重组载体转化至毕赤酵母外源蛋白表达工程菌株获得。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

编码所述毕赤酵母翻译相关因子Bcy1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。