[发明专利]稳定表达AMPA受体GluR1/GluR2细胞株及其构建方法在审
| 申请号： | 201910641345.8 | 申请日： | 2019-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN111269939A | 公开（公告）日： | 2020-06-12 |
| 发明（设计）人： | 涂海军 | 申请（专利权）人： | 湖南大学深圳研究院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 温可睿 |
| 地址： | 518054 广东省深圳市南山区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 ampa 受体 glur1 glur2 细胞株 及其 构建 方法 | ||
1.稳定表达AMPA受体GluR1/GluR2的细胞株的构建方法，其包括：
构建含有GluR1基因CDS序列和信号肽A的pQCXIH载体，为载体A；
构建含有GluR2基因CDS序列和信号肽B的pQCXIH载体，为载体B；
分别以逆转录病毒包装载体A和载体B，获得假病毒A、假病毒B；
以所述假病毒A和假病毒B侵染宿主细胞后，经潮霉素B筛选得到稳定表达AMPA受体GluR1/GluR2的细胞株。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，
所述GluR1基因CDS序列如SEQ ID NO:1所示；
信号肽A的序列如SEQ ID NO:3所示；
所述GluR2基因CDS序列如SEQ ID NO:2所示；
信号肽B的序列如SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，
所述载体A中还包括Flag标签；所述载体B中还包括Myc标签。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述宿主细胞为Hela细胞。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述逆转录病毒包装载体为pVSV-G。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述侵染的培养基为DMEM培养基。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述宿主细胞的密度为2×105cells/孔。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述潮霉素B筛选的浓度为250ng/μL。
9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述筛选具体为：每2天更换含有250ng/μL潮霉素B的新鲜培养基，共筛选培养2周。
10.权利要求1～9任一项所述的构建方法制得的稳定表达AMPA受体GluR1/GluR2的细胞株。
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