[发明专利]一种诱导性多潜能干细胞的方法

权利要求书

1.一种人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，包括无血清培养基、促进皮层神经细胞分化的添加物以及植物提取物。

2.如权利要求1所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述无血清培养基包括基础培养基和培养基添加物，所述无血清培养基为DMEM/F12，Neurobasal，RPMI 1640，MEM、DMEM和IMDM培养基中的一种或几种；所述培养基添加物包括0.6-60g/L的血清白蛋白，1-10nM的丙氨酸二肽，1-10mg/L的丙酮酸钠，1-10nM的盐酸噻胺，1-10mg/L的盐酸吡哆醇，100-1000μg/L的抗坏血酸钠，1-5％的N2细胞培养添加剂，1-5％的B27细胞培养添加剂，25-250μM的非必需氨基酸。

3.如权利要求2所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述非必须氨基酸包括S-腺甘蛋氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、L-高半胱氨酸、L-羟脯氨酸、L-高胱氨酸、L-3-氨基丁酸、聚精氨酸中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述促进皮层神经细胞分化的添加物包括1-00ng/ml的多效生长因子，1-10ng/ml的胰岛素样生长因子-1，1-30ng/L的成纤维生长因子-2，1-10μg/L的脑源性神经营养因子，1-10μg/L的胶质细胞源性神经营养因子，0.05-2uM的SB431542，0.1-0.4uM的RepSox。

5.如权利要求1所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述植物提取物包括红景天提取物和刺蒺藜提取物。

6.如权利要求5所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述红景天提取物和刺蒺藜提取物的质量比为景天提取物：刺蒺藜提取物＝1:2～4。

7.如权利要求6所述的人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养体系，其特征在于，所述红景天提取物和刺蒺藜提取物的质量比为景天提取物：刺蒺藜提取物＝1:3。

8.一种人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在无血清培养基中加入培养基添加物，获得前期传代培养基，将皮肤成纤维细胞诱导的iPSCs细胞，加入前期基础培养基，进行传代培养；

(2)将传至3代的iPSCs细胞移至添加有促进皮层神经细胞分化的添加物和植物提取物的培养基中，进行诱导分化培养，其中更换新鲜培养液；

(3)细胞密度接近饱和，吸出培养基，进行检测，鉴定细胞分化程度。