[发明专利]一种填充制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种填充制剂及其制备方法，制备方法包括以下步骤：取外周血，离心得富血小板血浆，将其冻存，然后取出冻融，继续离心去除底部的膜碎片，得富血小板因子血浆，备用；取自体皮下脂肪，制得脂肪颗粒，取脂肪颗粒，向其中加入DMSO冷冻液进行冻存，然后复苏，向其中加入无菌生理盐水，得脂肪颗粒混悬液，最后向脂肪颗粒混悬液中加入胰岛素，摇匀备用；将脂肪颗粒离心，弃去上层油脂，得脂肪细胞，将脂肪细胞扩增培养至P4代，得脂肪干细胞重悬液，备用；将富血小板因子血浆、脂肪颗粒混悬液和脂肪干细胞重悬液按照一定体积比混匀，制得。该填充制剂可有效解决现有的填充材料存在的成活率低、移植后维持时间短以及填充效果差的问题。

技术领域

本发明涉及填充制剂技术领域，具体涉及一种填充制剂及其制备方法。

背景技术

随着年龄的增长，面部会逐渐出现凹陷、皱纹、皮肤老化等情况，这对于天生爱美的人来说是个不小的打击，如何使自己的面部和肌肤恢复到年轻状态，也成了他们孜孜以求的目标，随之诞生了各种面部填充材料和技术，其中自体脂肪已成为组织填充的理想材料之一。

脂肪组织是一个理想的自体组织细胞来源，通过较小创伤的外科吸脂即可大量获得，在过去的20余年中，自体脂肪组织移植已大量用于填充外科和组织的重建，这些不只限于创伤后面部或身体的缺损，如发育障碍、半侧颜面萎缩、放射损伤后遗症的治疗，还包括其他的填充治疗，如面部皱纹的填充等。

移植需指定详细的计划，包括脂肪的获取方式、保存方法和脂肪移植的全过程，由于有不可预测的吸收率，为了达到最好的治疗效果常需要多次重复移植，现有的脂肪移植手术一般存在脂肪移植成活率低、移植后维持周期短以及填充效果差等弊端。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种填充制剂及其制备方法，该填充制剂可有效解决现有的填充材料存在的成活率低、移植后维持时间短以及填充效果差的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种填充制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)采取外周血，用800～2000g/min的离心力离心6～12min，吸取中间部分，得富血小板血浆，将富血小板血浆置于-40～-80℃条件下冻存3～8h后取出冻融，然后将富血小板血浆于2000～4000rpm/min的离心力下离心6～10min，去除底部固体碎片，得富血小板因子血浆，备用；

(2)吸取自体皮下脂肪，静置，弃去上层油脂后用无菌生理盐水洗涤2～3次，得脂肪颗粒，取一半脂肪颗粒，向其中加入1-4倍脂肪颗粒体积的DMSO冷冻液，将脂肪颗粒进行梯度降温冻存，然后复苏脂肪颗粒并洗去脂肪颗粒内的DMSO冷冻液，再向其中加入无菌生理盐水，摇匀得脂肪颗粒混悬液，最后向脂肪颗粒混悬液中加入胰岛素，控制脂肪颗粒混悬液中胰岛素浓度为100～400mU/L，摇匀备用；

(3)取步骤(2)中剩余的脂肪颗粒，在2000～4000rpm/min的离心力下离心10-20min，弃去上层油脂，得脂肪细胞，然后按照2～3mL/瓶的比例将脂肪细胞接种到培养瓶中培养，每3～5天进行换液处理，长至50～70％融合度时用胰蛋白酶进行消化得原代脂肪细胞，将原代脂肪细胞按照5000-8000个/cm²的比例接种到新的培养瓶中进行传代培养，对传代所得细胞进行消化和重悬，得脂肪干细胞重悬液；

(4)取步骤(1)中的富血小板因子血浆、步骤(2)中的脂肪颗粒混悬液和步骤(3)中的脂肪干细胞重悬液按体积比为1～2:3～7:3～7混匀，制得。

进一步地，步骤(1)中将采取的外周血用1500g/min的离心力离心10min，弃去上段贫血小板血浆和下段红细胞，得富血小板血浆，将富血小板血浆置于-80℃条件下冻存6h后取出冻融，然后将富血小板血浆于3000rpm/min的离心力下离心8min，去除底部的膜碎片，得富血小板因子血浆，备用。