[发明专利]定量检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.定量检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括，

将硝酸纤维素膜包被检测线与质控线，所述检测线使用NGAL包被抗体，所述质控线使用NGAL捕获抗体的二抗；

还包括制备结合垫，其包括：使用洗涤液离心洗涤捕获抗体，所述洗涤液为纯水；纳米增强型时间分辨荧光微球与NGAL捕获抗体溶解于PH6-8、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应30min-12h；加入封闭液封闭30min-12h，所述封闭液含有0.1-1％F68、10-50mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到30-120倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有1-3％吐温20及20％海藻糖或蔗糖；将稀释的微球定量喷涂到第一载体；

还包括制备样品垫，其包括将第二载体浸泡于含有0.9％NaCl和0.5-3％的表面活性剂S9的水溶液中，然后烘干；

其中，所述捕获抗体为NGAL捕获抗体，所述百分比浓度为质量百分比。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米增强型时间分辨荧光微球与捕获抗体溶解于PH6、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应30min；加入封闭液封闭12h，所述封闭液含有1％F68、50mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到120倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有3％吐温20及20％海藻糖或蔗糖。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，纳米增强型时间分辨荧光微球与捕获抗体溶解于PH8、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应12h；加入封闭液封闭30min，所述封闭液含有0.1％F68、10mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到30倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有1％吐温20及20％海藻糖或蔗糖。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米增强型时间分辨荧光微球直径为100nm-300nm。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述捕获抗体与微球混合的重量比是1/5-1/20。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一载体为玻璃纤维膜。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二载体为玻璃纤维膜。

8.定量检测NGAL的时间分辨免疫层析试纸条，由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，所述底板、硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫依次交错黏贴，其特征在于，所述试纸条由权利要求1-7任一所述的方法制得。