[发明专利]一种基于二氧化锰纳米花和荧光材料的微生物检测方法

权利要求书

1.一种基于二氧化锰纳米花和荧光材料的微生物检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.利用修饰有所述目标微生物的第一生物识别元件的免疫磁性元件对所述目标微生物进行捕获，通过磁分离得到纯化的和富集的磁性元件-目标微生物复合体；

S2.将修饰有所述目标微生物的第二生物识别元件的免疫二氧化锰纳米花-荧光材料复合体和所述磁性元件-目标微生物复合体进行反应，形成磁性元件-目标微生物-二氧化锰纳米花-荧光材料复合体；

S3.利用二氧化锰还原剂还原所述磁性元件-目标微生物-二氧化锰纳米花-荧光材料复合体上的二氧化锰纳米花，使荧光材料在适当激发条件下可重新发射荧光；

S4.利用光谱仪检测重新释放的荧光强度，并根据荧光强度与目标微生物浓度间的关系曲线，计算得到所述目标微生物的浓度；

所述步骤S2具体包括以下步骤：

S21.利用表面活性剂辅助法制备所述二氧化锰纳米花；

S22.先对所述二氧化锰纳米花进行氨基功能化，再对氨基化的二氧化锰纳米花与所述荧光材料通过缩合反应得到二氧化锰纳米花-荧光材料复合体，然后对其修饰第二生物识别元件，形成所述免疫二氧化锰纳米花-荧光材料复合体，复溶于超纯水中备用；

其中，利用3-氨丙基三乙氧基硅烷和溶于99％乙醇的二氧化锰纳米花混匀在37℃过夜孵育，反应完成生成所述氨基化的二氧化锰纳米花；

S23.将所述免疫二氧化锰纳米花-荧光材料复合体与所述磁性元件-目标微生物复合体进行混合孵育，形成所述磁性元件-目标微生物-二氧化锰纳米花-荧光材料复合体，并利用磁场分离得到。

2.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述步骤S3中利用谷胱甘肽或双氧水还原所述磁性元件-目标微生物-二氧化锰纳米花-荧光材料复合体上的二氧化锰纳米花。

3.根据权利要求2所述的微生物检测方法，其特征在于，使用谷胱甘肽时，谷胱甘肽的加入量为100μL，浓度为20mM。

4.根据权利要求1～3任一项所述的微生物检测方法，其特征在于，步骤S4中所述荧光强度与目标微生物浓度间的关系曲线的建立包括：将多组含有已知浓度目标微生物的样品经过所述步骤S1-S3后得到相应的多组荧光强度，基于多组已知目标微生物浓度和所得多组荧光强度通过线性拟合获得。

5.根据权利要求1～3任一项所述的微生物检测方法，其特征在于，所述第一生物识别元件和所述第二生物识别元件与所述目标微生物的结合位点不同。

6.根据权利要求5所述的微生物检测方法，其特征在于，所述目标微生物为一种或多种，当为多种时，针对不同目标微生物，所述荧光材料应具有不同发射波长。