[发明专利]一种用于生产谷胱甘肽的重组大肠杆菌的混合培养工艺及其应用

权利要求书

1.一种用于生产谷胱甘肽的重组大肠杆菌的混合培养工艺，其特征在于，步骤包括：分别将GshF基因和ppk2基因整合到质粒载体pET-30a上，获得含有GshF基因的大肠杆菌和含有ppk2基因的大肠杆菌，二者以3:2-2:1的比例混合培养获得混菌细胞；

所述含有GshF基因的大肠杆菌的制备方法包括：利用质粒载体将密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的基因GshF转化大肠杆菌；

所述含有ppk2基因的大肠杆菌的制备方法包括：利用质粒载体将密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的基因ppk2转化大肠杆菌；

所述混合培养的方法是：将活化后的含有GshF基因的大肠杆菌和含有ppk2基因的大肠杆菌按照3:2-2:1的比例混合后，以8%-12%体积比的接种量接种，在37±0.5 ℃，pH为6.7±0.1，通气量20-100 L·h^-1、搅拌转速100-600 rpm，使溶氧控制在10%-40%，发酵至对数后期收集菌体得混菌细胞。

2.如权利要求1所述工艺在生产谷胱甘肽中的应用，其特征在于，所述含有GshF基因的大肠杆菌和含有ppk2基因的大肠杆菌混合培养获得的混菌细胞在37-45 ℃，pH为6-7.5条件下，通过诱导表达，催化合成还原型谷胱甘肽。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述混菌细胞在40-42℃，pH为6.5-7.0条件下，通过诱导表达，催化合成还原型谷胱甘肽。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述催化合成还原型谷胱甘肽中使用的底物为L-甘氨酸 130-150 mM、L-谷氨酸钠130-150 mM、MgSO₄·7H₂O 60-80 mM、L-半胱氨酸盐酸盐 110-130 mM、ATP 3-7 mM、六偏磷酸钠50-70 mM。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述催化合成还原型谷胱甘肽中使用的底物为L-甘氨酸 135-145 mM、L-谷氨酸钠135-145 mM、MgSO₄·7H₂O 65-75 mM、L-半胱氨酸盐酸盐 115-125 mM、ATP 4-6 mM、六偏磷酸钠55-65 mM。