[发明专利]溶瘤病毒及其应用和治疗癌症的药物

权利要求书

1.一种溶瘤病毒，其特征在于，其基因组上插入有第一调控元件；所述第一调控元件包括：癌细胞特异性启动子序列和由所述癌细胞特异性启动子驱动在目标癌细胞中表达特异性蛋白酶的第一核酸序列；所述癌细胞特异性启动子序列位于所述第一核酸序列上游，第一调控元件的插入位置位于溶瘤病毒的两个基因间；

所述溶瘤病毒的基因组上还插入有第二调控元件，所述第二调控元件包括：用于编码胞外牵引信号肽的第二核酸序列和用于编码特异性切割位点的第三核酸序列；所述特异性切割位点被所述特异性蛋白酶识别并切割；所述第二核酸序列位于所述第三核酸序列的上游；

所述第二调控元件位于所述溶瘤病毒的必需基因的5’末端，所述第二调控元件位于所述溶瘤病毒的必需基因的开放阅读框的起始密码子与第二三联体密码之间；

所述癌细胞特异性启动子选自端粒酶逆转录酶启动子、人表皮生长因子受体-2启动子、E2F1启动子、骨钙蛋白启动子、癌胚抗原启动子、Survivin启动子和血浆铜蓝蛋白启动子中的任意一种；

所述目标癌细胞为肺癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞、前列腺癌细胞、脑肿瘤细胞、人结肠癌细胞、宫颈癌细胞、肾癌细胞、卵巢癌细胞、头颈部癌细胞、黑色素瘤细胞、胰腺癌细胞或食道癌细胞；

所述特异性蛋白酶为人类鼻病毒3C蛋白酶、凝血酶、Xa因子蛋白酶、烟草蚀纹病毒蛋白酶或重组PreScission蛋白酶；

所述溶瘤病毒选自单纯疱疹病毒、腺病毒、牛痘病毒、新城疫病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，当所述特异性蛋白酶为人类鼻病毒3C蛋白酶时，所述特异性切割位点的氨基酸序列为：LEVLFQGP；

当所述特异性蛋白酶为凝血酶时，所述特异性切割位点的氨基酸序列为：LVPRGS；

当所述特异性蛋白酶为Xa因子蛋白酶时，所述特异性切割位点的氨基酸序列为：IE/DGR；

当所述特异性蛋白酶为烟草蚀纹病毒蛋白酶时，所述特异性切割位点的序列为：ENLYFQG；

当所述特异性蛋白酶为重组PreScission蛋白酶时，所述特异性切割位点的序列为：LEVLFQGP。

3.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述胞外牵引信号肽为干扰素α2、白介素2、人血清白蛋白、人免疫球蛋白的重链或源自海洋桡脚类动物的萤光素酶胞外分泌信号肽。

4.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述第一调控元件还包括有增强子序列，所述增强子序列位于所述癌细胞特异性启动子序列和所述特异性蛋白酶编码序列之间，所述增强子序列用于增强所述特异性蛋白酶的表达。

5.根据权利要求4所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述增强子序列为CMV增强子或SV40增强子序列。

6.根据权利要求1-5任一项所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒的一个或多个必需基因的5’末端插入所述第二调控元件。

7.根据权利要求1-5任一项所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为1型单纯疱疹病毒，必需基因为ICP27，所述癌细胞特异性启动子为端粒酶逆转录酶启动子，所述特异性蛋白酶为人类鼻病毒3C蛋白酶，所述胞外牵引信号肽为干扰素α2信号肽，所述特异性切割位点的氨基酸序列为LEVLFQGP；所述第二调控元件位于所述必需基因的开放阅读框的起始密码子ATG与第二三联体密码之间；所述第一调控元件位于所述必需基因的下游。