[发明专利]四种具有抗癌活性的烈味脚骨脆二萜的制备方法和用途

说明书

本发明涉及四种具有抗癌活性的烈味脚骨脆二萜的制备方法和用途，所述的新化合物1‑4，具有如下结构。本发明的四个新化合物对于人肺癌细胞A549及人肝癌细胞HepG2具有细胞毒活性，可用于抗癌药物的开发和应用。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及烈味脚骨脆中新的克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤的发生发展离不开癌细胞的增殖，基于此，目前临床上用于抗癌的药物大多是通过干扰肿瘤细胞增殖进而诱导细胞凋亡来发挥抗癌功效的。

肿瘤细胞可从增殖衰老机制中逃离, 从而获得无限增殖的能力。细胞增殖依赖于细胞的分裂，细胞分裂需要进行完整的周期循环，其中包括分裂间期和分裂期，分裂期又包括G1期、S期和G2期，药物作用于细胞周期的任何一个时期都会中断细胞的分裂，打破其永生的状态，通过诱导细胞凋亡来发挥抗癌的作用。

植物作为丰富的天然产物资源库为我们提供了大量的先导化合物，为了寻找新的高效抗肿瘤化合物，我们建立了人肺癌细胞系A549和人肝癌细胞系HepG2细胞筛选模型。在细胞指数生长期加入不同浓度的受试药物，处理一定时间后加入MTT测定光密度值来评判化合物细胞毒性，从而筛选出有较强细胞毒活性的化合物并确定对其最敏感的细胞株，进一步通过流式细胞术分析该化合物对最敏感细胞株的诱导凋亡及周期阻滞作用，最终发现可能的抗癌先导化合物，为其进一步开发提供基础。

发明内容

本发明的目的在于提供烈味脚骨脆中4个新的克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。

本发明提供的新化合物1-4属于克罗烷型二萜，其结构如图1所示。

本发明还提供了所述新化合物1-4的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）烈味脚骨脆（Casearia graveolens Dalzell）的叶用溶剂提取，回收提取液得粗提物；

（2）步骤（1）所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，回收溶剂得到萃取物；

（3）步骤（2）所得萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱；

（4）上述步骤（3）中所得流份经MPLC（中压液相色谱, 色谱填料为ODS）分离，以甲醇/水，或乙腈/水混合溶剂为流动相梯度洗脱；

（5）上述步骤（4）中所得流份经HPLC-RI（高效液相-示差检测）色谱分离，以甲醇/水为流动相洗脱，或以乙腈/水为流动相梯度洗脱，得到化合物1-4。

本发明提供的新化合物1-4的制备方法，所述烈味脚骨脆为大风子科（Flacourtiaceae）脚骨脆属烈味脚骨脆（Casearia graveolens Dalzell）茎叶的提取物。

本发明提供的新化合物1-4的制备方法，步骤（1）所述的提取方法为加热回流提取或超声提取，所用溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的至少一种，药材：溶剂的重量体积比为1: 5~1: 15。

本发明提供的新化合物1-4的制备方法，步骤（2）所述的萃取方法，所用有机溶剂为石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的任意一种，水溶液和有机溶剂体积比1: 1~1: 2。

本发明提供的新化合物1-4的制备方法，步骤（3）中，洗脱溶剂为石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂，其比例为100: 2~100: 30。

本发明提供的新化合物1-4的制备方法，步骤（4）中，所述甲醇/水混合溶剂的比例为6: 4~9: 1，优选7: 3~8: 2，或乙腈/水混合溶剂比例为6: 4~8: 1，优选7: 3~8: 2。