[发明专利]一种瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒，其中，所述试剂盒对PADI2基因多态性进行检测，试剂盒包括三对扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中扩增引物用于扩增rs2746533位点、rs2076616位点和rs10788656位点中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应其中一个SNP位点的上下游区域。本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增PADI2信号通路的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒，属于检测试剂盒领域。

背景技术

肽基精氨酸脱亚氨酶(peptidylarginine deiminase，PAD)在较高钙离子浓度条件下可催化蛋白质中的精氨酸残基转换为瓜氨酸残基。由于蛋白质瓜氨酸化后结构的稳定性发生变化， PAD介导的蛋白质翻译后修饰可导致目标蛋白质的结构和调控功能发生一系列改变，结果影响生理病理过程。人PAD家族包含5个成员，分别为PADI 1、2、3、4、6，它们均集聚在染色体1p36.13区域内。近年来，有研究者发现PAD家族成员及其瓜氨酸化功能在肿瘤发生过程中起着重要作用。McElwee等用转录组测序技术发现，人乳腺癌细胞系中PADI2mRNA 表达水平与原癌基因人类表皮生长因子受体(human epidermal growthfactor receptor-2，HER2) 的高表达相关，而HER2是诊断乳腺癌公认的分子标志物。Cherrington等发现，在犬乳腺肿瘤细胞CMT25中表皮细胞生长因子(epidermal growthfactor，EGF)可上调PADI2的转录和翻译，而PADI2可通过增强肿瘤微环境的炎症反应促进肿瘤进展。这些发现提示PADI2可能参与乳腺癌等肿瘤的癌变过程。

通过进一步深入研究，发现PADI2基因的SNP位点除了乳腺癌外，多个位点与乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肺癌、直肠癌发病明显相关。免疫组化实验发现，PADI2在95％的乳腺浸润性导管癌、97.5％的结肠腺癌、88％的食管癌、92.5％的肺癌和90％甲状腺乳头状癌组织高表达。除了一些间充质样细胞和内皮细胞外，PADI2在正常宫颈组织、肺组织、卵巢组织或甲状腺组织中不表达，在乳腺、结肠、食管、胃、肝和直肠正常组织的上皮细胞中低表达。ELISA实验发现PADI2在86％的肝癌、38％宫颈癌和32％胃癌患者外周血中表达水平上升2倍以上。通过对上述患者的PADI2基因进行筛查，筛选出PADI2基因的rs2746533、rs2076616、 rs10788656位点与上述癌症高度相关。故设计一款瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒，可以作为临床癌症发病情况的前期筛查，具有十分重要的临床意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用的瓜氨酸催化转化基因的单核苷酸多态性检测试剂盒对PADI2基因多态性进行检测，具体技术方案如下：

所述试剂盒内包括三对扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中扩增引物用于扩增rs2746533位点、rs2076616位点和rs10788656位点中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应其中一个SNP位点的上下游区域。试剂盒中包含三对引物分别对应三个SNP位点，扩增时可以同时扩增三个SNP位点或任意选择两个位点进行扩增，使得试剂盒的使用更加灵活，并且三对引物经过精确设计，扩增效率高错配低，扩增产物易检测易分离，便于进一步的测序或检测工作的顺利进行。

优选的，rs2746533位点的上下游扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：1～2所示。