[发明专利]三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因及其编码蛋白和应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体是一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因及其编码蛋白和应用。本发明利用转录组测序获得的unigene和RACE技术从三疣梭子蟹中扩增得到PtCLec2基因cDNA，发现重组的PtCLec2蛋白具有显著的抑菌、菌凝集及菌清除活性。重组蛋白PtCLec2对革兰氏阴性菌(溶藻弧菌、铜绿假单胞菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌)具有明显的抑制效果。在Ca²⁺存在下，重组蛋白PtCLec2对溶藻弧菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌均具有明显的凝集效果。同时，对溶藻弧菌具有明显的清除作用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体的说是一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

无脊椎动物缺乏适应性免疫系统，它识别“非己”物质主要是依靠模式识别受体(PRRs)识别病原相关分子模式(PAMPs)来完成的。无脊椎动物模式识别受体主要包括：肽聚糖识别蛋白、革兰氏阴性菌结合蛋白、含硫酯键蛋白、清道夫受体、硫依赖型凝集素、血素、Toll样受体和C型凝集素。C型凝集素是一类钙离子依赖蛋白，该类蛋白均具有一个能够识别并结合糖类的糖类识别结构域(CRD)。CRD结构域中一般含有非常保守的四个半胱氨酸，并通过它们形成两对二硫键，以维持整个结构域的构象。CRD结构域含有4个Ca²⁺结合位点，其中Ca²⁺结合位点2的作用最重要，主要参与对糖类底物的结合。Ca²⁺结合位点2是由两个高保守的基序组成，第一个基序是EPN或QPD，分别特异性结合甘露糖或半乳糖；另一个基序是WND，主要参与钙离子的结合并维持疏水核心。

三疣梭子蟹是一种重要的海产经济蟹类，由于其营养价值丰富、生长迅速等优点，已成为我国重要海水养殖品种。近年来，三疣梭子蟹受弧菌等病原菌的影响病害频发，严重制约梭子蟹养殖业的发展。甲壳动物缺乏抗体和特异性免疫细胞，主要依靠先天免疫清除病原微生物，进行免疫防御。目前关于三疣梭子蟹C型凝集素的研究尚少，其Ca²⁺结合位点2基序的变异对基因功能的影响尚不清楚。因此，模式识别受体C型凝集素的发掘和利用对理解三疣梭子蟹的免疫防御机制、进行病害防治具有重要的理论和实践意义。

发明内容

本发明旨在提供一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因及其编码蛋白和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因，三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因为序列表SEQ ID No.1中的碱基序列所示。

一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因编码蛋白，所述PtCLec2基因编码蛋白为序列表SEQ ID No.2中的氨基酸序列所示。

一种三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因编码蛋白的应用，所述三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因的重组表达产物可制备为抗菌药物、免疫活性剂、饲料添加剂、防腐剂或保鲜剂。

所述三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因的重组表达产物可用于制备革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌的抗菌药物或凝集制剂。

所述革兰氏阴性菌为溶藻弧菌或铜绿假单胞菌；革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌或藤黄微球菌。

所述三疣梭子蟹C型凝集素PtCLec2基因的重组表达产物可用于制备菌清除制剂。

所述菌为溶藻弧菌。

本发明所具有的优点：