[发明专利]一种提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法在审
| 申请号： | 201910644186.7 | 申请日： | 2019-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN110423710A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 王光强;艾连中;夏永军;熊智强;张汇 | 申请（专利权）人： | 上海理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/04;C12R1/25 |
| 代理公司： | 上海德昭知识产权代理有限公司 31204 | 代理人： | 程宗德 |
| 地址： | 200093 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植物乳杆菌 十八碳烯 存活率 菌体沉淀 扩大培养 单菌落 种子液 培养液 油酸 保护剂溶液 培养液离心 技术效果 接种培养 菌种活化 转接 复水 重悬 优选 洗涤 | ||
1.一种提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，菌种活化，得单菌落；
步骤2，将所述单菌落接种培养，得种子液；
步骤3，将所述种子液转接至含有0.5g/L-2g/L十八碳烯酸的MRS液体培养基中扩大培养，得扩大培养液；
步骤4，将所述扩大培养液离心，得菌体沉淀；
步骤5，所述菌体沉淀经PBS缓冲液洗涤后重悬于PBS溶液或保护剂溶液中，转移至容器中，冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述菌种活化的方法为将所述植物乳杆菌通过固体MRS培养基中反复划线活化2-5次。
3.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述单菌落接种培养的方法为挑取已经活化好的单菌落接种培养12-16小时。
4.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述步骤3中扩大培养的条件为在35-40℃下培养12-16小时。
5.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述十八碳烯酸为油酸。
6.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述保护剂溶液中所述保护剂的含量为5-15wt％。
7.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述保护剂为山梨醇或蔗糖。
8.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法，其特征在于：
其中，所述冷冻干燥的参数为：预冷温度-45～-35℃，预冷时间2-4h，以0.8-1.5℃/min的速率升温至-30～-25℃以进行一次干燥，时间持续700-900min，然后以0.8-1.5℃/min的速率升温至20-25℃进行二次干燥，时间持续2-3h，冷阱温度-85～-70℃左右，真空度10-30Pa。
9.十八碳烯酸在植物乳杆菌冷冻干燥中作为提高存活率的添加剂的应用。
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