[发明专利]琥珀酸钠用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法

说明书

本发明公开了一种琥珀酸钠用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用及制备方法，本发明同时还提供了一种山羊精子冷冻保存用稀释液，包括琥珀酸钠、营养物质、缓冲物质等。本发明的山羊精子冷冻保存用稀释液，具有提高精子冷冻保存后精子活率、顶体和质膜完整率，使得山羊的繁殖性能和经济效益有显著提高的效果。

技术领域

本发明属于动物生物技术领域，涉及动物繁殖技术，尤其涉及琥珀酸钠用于制备山羊精子保存用稀释液的应用及制备方法。

背景技术

研究表明，精子在降温和冷冻保存的过程中，很容易产生各种损伤，包括物理性的、化学性的和生物性的损伤。与新鲜精液相比较，经冷冻-解冻处理的精液，其精子的成活率、精子活力、顶体完整率、线粒体活性和受胎率显著下降，而山羊的精液更是如此，这对于生产实践和科学研究来说是极其不利的因素。尽管山羊精液的冷冻保存技术已经有了长足的发展，但目前仍然存在很多问题有待解决。与新鲜精液相比较，经冷冻-解冻处理的精液，其精子的成活率、精子活力、顶体完整率、线粒体活性和受胎率显著下降。

琥珀酸钠，又名丁二酸钠，白色颗粒或结晶粉末，白色颗粒或结晶粉末。目前丁二酸钠已经公开的作用是作为食品添加剂，与味精、I+G混合使用有协同增鲜作用,对热有较好的稳定性，溶解性能好，广泛用于方便面海鲜汤料、肉制品、酱油、海鲜类产品、调味品、腌制咸菜等。前并无相关报道将其用于动物精液冷冻保存技术中。

发明内容

针对现有技术的缺陷或者不足，本发明提供了一种琥珀酸钠用于制备山羊精子保存用稀释液的应用及制备方法。

本发明同时还提供了一种山羊精子冷冻保存用稀释液，所提供的山羊精子冷冻保存用稀释液用于保存山羊精子，包括琥珀酸钠和营养物质。

优选的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括琥珀酸钠以及营养物质。

更优选的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括缓冲物质、营养物质、冷冻保护剂、抗菌物质以及琥珀酸钠。

更具体的，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液包括柠檬酸钠、柠檬酸、碳酸氢钠、果糖、卵磷脂、二甲基亚砜、乙二醇、青霉素、链霉素和琥珀酸钠。

此外，所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的pH值为7。

本发明所述的山羊精子冷冻保存用稀释液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠0.25-1.25g，柠檬酸0.75-6g，碳酸氢钠0.062-0.5g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖0.5-4g，卵磷脂0.125-1g，二甲基亚砜6-30mL，乙二醇6-30mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.07-0.56g，链霉素0.06-0.48g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；

(4)取琥珀酸钠0.24-0.68g，加入C液50mL溶解后定容至100mL，即得到山羊精子冷冻保存用稀释液。

最优选的，包括如下步骤：

(1)将柠檬酸钠1.25g，柠檬酸3.35g，碳酸氢钠0.28g，加50mL无菌水溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到A液；

(2)将果糖2.25g，卵磷脂0.53g，二甲基亚砜18mL，乙二醇18mL，加A液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；

(3)将青霉素0.25g，链霉素0.25g，加B液50mL溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到C液；

(4)取琥珀酸钠0.46g，加入C液50mL溶解后定容至100mL，离心取上清液即得到山羊精子冷冻保存用稀释液