[发明专利]一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用

说明书

一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用，属于荧光免疫检测技术领域。为了更快速、稳定、准确检测旋毛虫感染，本发明提供了一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂由原核表达的重组肌幼虫期的Ts‑WM5抗原、肠道感染性幼虫的Ts‑WN10抗原、成虫期的Ts‑ZH68抗原和新生幼虫期的Ts‑T668‑C抗原组成的旋毛虫鸡尾酒抗原；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG，上述各组分组合后制备成试纸条，本发明可用于猪旋毛虫感染的早期快速检测。

技术领域

本发明属于荧光免疫检测技术领域，具体涉及一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

旋毛虫病是一种危害非常严重的人兽共患病，其不但可给畜牧业生产造成巨大的经济损失，而且对人类身体健康也构成巨大威胁，人或动物主要通过生食或半生食含有旋毛虫的肉类(主要为猪肉)而发病。

对于屠宰动物旋毛虫病的检验，常采用的法规检验方法为镜检法及集样消化法。然而以上两方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，其敏感性为肉中虫体密度达到每克3条虫体时方可检出。集样消化法虽可大大提高检出率，将虫体检出率提高至每克肉1条虫体，但该方法仍十分繁琐，在发现阳性样品时仍需对阳性组采用消化法进行逐头检测。从敏感性的角度来看，由镜检法和集样消化法所造成漏检的肉类均存在安全隐患并可引起人类的感染(摄入75条虫体即可引起人的感染)。应用间接荧光免疫试验，免疫酶染色试验，免疫印迹试验，免疫吸附试验(ELISA)等技术来检测旋毛虫抗体，操作较复杂，常需要2-3个小时检测出结果，而且需要昂贵的仪器和专业技能人员在实验室完成，不能应用于现场和基层单位进行猪旋毛虫病的检测。

目前，旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ES抗原是OIE及国际旋毛虫委员会规定的唯一的用于血清学抗体检测的标准抗原。然而ES抗原成分复杂，制备繁琐、生产周期长、批次质量不均，而且存在严重的诊断盲区(感染后19d前无法检出)和交叉反应等问题，因而阻碍了其实际应用。

发明内容

针对如何快速、稳定、准确检测猪旋毛虫感染情况，本发明提供了一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述样品垫上设置有加样孔；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂有旋毛虫鸡尾酒抗原，所述旋毛虫鸡尾酒抗原由肌幼虫期的Ts-WM5重组抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组抗原、成虫期的Ts-ZH68重组抗原和新生幼虫期的Ts-T668-C重组抗原组成；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。

进一步地限定，所述样品垫材质为玻璃纤维素膜XQ-Y8；所述结合垫材质为玻璃纤维素膜Ahistrom8964；所述层析膜材质为硝酸纤维素膜Millipore135。

进一步地限定，所述旋毛虫鸡尾酒抗原中原核表达的重组肌幼虫期的Ts-WM5抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10抗原、成虫期的Ts-ZH68抗原和新生幼虫期的Ts-T668-C抗原的浓度比为(0.5-1)：(0.5-1)：(0.5-0.75)：(0.5-0.75)mg/mL。

本发明还提供了上述旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

1)旋毛虫鸡尾酒抗原的制备：分别将表达肌幼虫期的Ts-WM5重组蛋白、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组蛋白、成虫期的Ts-ZH68重组蛋白和新生幼虫期的Ts-T668中C端的重组蛋白的各重组质粒转化宿主菌，经诱导表达后，超声破碎菌体，离心收集沉淀，尿素溶解包涵体，然后经亲和纯化分别获得肌幼虫期的Ts-WM5重组抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组抗原、成虫期的Ts-zh68重组抗原、新生幼虫期的Ts-T668-C重组抗原，将各重组抗原按照浓度比混合后获得旋毛虫鸡尾酒抗原；