[发明专利]一种鸡胚胎干细胞的分离培养方法及培养基

权利要求书

1.一种鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，为在基础培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子、胰岛素样生长因子-1、伴清蛋白、核苷酸腺苷、重组白细胞介素-6和重组白细胞介素-11得到的培养基。

2.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，所述基础培养基为高糖DMEM，含有如下成分：1-2mmol/L丙酮酸钠、2-3mmol/L L-谷氨酰胺、10-15％胎牛血清(体积比)、2-3％鸡血清(体积比)、1-2％非必需氨基酸、5.0-5.5×10^-5mmol/Lβ-巯基乙醇、1％青/链霉素(体积比)。

3.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，培养基中，所述的碱性成纤维细胞生长因子、干细胞因子、胰岛素样生长因子-1分别为人源碱性成纤维细胞生长因子、人源干细胞因子和人源胰岛素样生长因子-1。

4.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，所述胰岛素样生长因子-1在所述体外培养基中的终浓度为10-20ng/mL。

5.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，所述伴清蛋白在所述体外培养基中的终浓度为20-30ng/mL。

6.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，所述核苷酸腺苷在所述体外培养基中的终浓度为1-2μmol/L。

7.如权利要求1所述的鸡胚胎干细胞的培养基，其特征在于，所述重组白细胞介素-6和重组白细胞介素-11在所述体外培养基中的终浓度为1-2ng/mL。

8.一种鸡胚胎干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：用胰酶消化法获得鸡胚胎干细胞，然后将细胞重悬于所述的胚胎干细胞培养基中，再接种到预先用10μg/mL丝裂霉素-C处理的0.1％明胶包被的鸡胚成纤维细胞饲养层上进行原代培养。

9.如权利要求8所述的鸡胚胎干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述鸡胚成纤维细胞饲养层接种至24孔板，接种密度为(3-5)×10⁵细胞/孔。