[发明专利]一种荧光标记的多态性遗传标记复合扩增体系及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种荧光标记的多态性遗传标记复合扩增体系及其试剂盒，用于扩增18个非CODIS‑STR基因座，1个CODIS‑STR基因座D2S1338，以及2个性别基因座；该扩增体系及其试剂盒中采用的扩增引物包含SEQ ID NO.1～42所述序列。本发明所述的复合扩增体系可以一次性同时扩增得到19个具有良好多态性和高个体识别力的STR基因座和2个性别基因座信息。本发明所述的试剂盒适用于人类生物样本，具有准确性高、灵敏度高、重复性好及抗抑制性强等特点，其为个体识别、亲缘关系鉴定、突变事件等司法鉴定提供了有效的补充检测手段。

技术领域

本发明属于生物技术与遗传学技术领域，尤其涉及一种荧光标记的多态性遗传标记复合扩增体系及其试剂盒和应用，该扩增体系用于扩增18个非CODIS-STR基因座、1个CODIS-STR基因座以及2个性别基因座。

背景技术

短串联重复序列(short tandem repeats，STR)是存在于人类基因组DNA中的一类具有长度多态性的DNA序列，由2-6个碱基的重复单位串联构成，是目前法医物证鉴定中应用最广泛的遗传标记。STR约占人类基因组的5％，估计有20-50万个，平均每6-10kb就出现一个，约50％具有遗传多态性，其多态性主要源自核心序列重复次数在个体间的差异，并且这种差异在遗传过程中遵循孟德尔遗传规律。因此，STR基因座被广泛应用于司法鉴定领域的个体识别、亲缘鉴定和群体调查等。

其中，常染色体STR基因座是司法鉴定中应用最为广泛的一类基因座，常用STR基因座分布在人类22对常染色体上，多态性较好。目前，各国的核心STR基因座有所差别。1995年4月，英国将SMG Plus试剂盒中的STR基因座(FGA、TH01、vWA、D2S1338、D3S1358、D8S1179、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11)作为核心基因座开始建立国家罪犯DNA数据库。鉴于英国建立国家罪犯DNA数据库的成功和STR分型的广阔应用前景，1997年11月，美国联邦调查局确立了联合DNA索引系统(Combined DNA Index System，CODIS)，开始筹建美国国家罪犯DNA数据库。该系统由13个核心STR基因座组成，包含CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51和D21S11。2017年，CODIS系统增加了7个STR基因座(D1S1656、D2S441、D2S1338、D10S1248、D12S391、D19S433和D22S1045)，作为拓展的核心STR基因座。欧洲针对STR基因座的特点及人群分布情况确定了12个STR基因座为欧洲标准体系(European Standard Set，ESS)，包括FGA、TH01、VWA、D1S1656、D2S441、D3S1358、D8S1179、D10S1248、D12S391、D18S51、D21S11、D22S1045；之后，又增加了4个STR基因座(D2S1338、D16S539、D19S433和SE33)。德国核心STR基因座较少，仅包括FGA、TH01、SE33、VWA、D3S1358、D8S1179、D18S51和D21S11。

国内外多家公司及实验室基于上述STR基因座开发了PCR复合扩增试剂盒(或检测体系)，其中部分STR基因座在中国人群中多态性较差。在一般的法医学鉴定中，现有商品化试剂盒的STR基因座往往足够，不需要额外增加其他基因座。但在发生突变的亲权鉴定案件中，当累积亲权指数介于0.0001～10000之间时，常常需要补充检测STR基因座，方能得到明确的鉴定结论；对于复杂的亲缘关系鉴定，如全同胞、半同胞、祖孙鉴定等也需要更多的STR基因座参与，方能提供更为全面的遗传信息，帮助判断亲缘关系。