[发明专利]一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法

权利要求书

1.一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：

无机盐 10~12g

氨基酸 1~2g

偏多酸钙 0.003~0.005g

氧化胆碱 0.003~0.005g

叶酸 0.003~0.005g

肌醇 0.007~0.0075g

烟酰胺 0.003~0.005g

吡哆醇 0.003~0.005g

核黄素 0.0003~0.0005g

硫胺素 0.003~0.005g

葡萄糖 4~5g

酚红 0.01~0.02g。

2.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的无机盐选自氯化钙、氯化钾、硫酸镁、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、硝酸钾和硝酸铁中的一种或几种混合物。

3.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的氨基酸选自L-精氨酸、L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸和L-丝氨酸中的一种或几种混合物。

4.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的葡萄糖为α-D-呋喃葡萄糖、-D-呋喃葡萄糖、α-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖中的一种或者几种。

5.一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法，其特征在于：所述的诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法如下：

S1葡萄糖样品的制备：将10g葡萄糖粉末溶于33.3mL生理盐水中，震荡均匀，通过微孔滤膜过滤除菌，得浓度为300mg/mL葡萄糖样分装成1mL/支；

S2氧化胆碱样品的制备：将10g氧化胆碱粉末溶解于10mL超纯水，通过微孔滤膜过滤除菌，放置于4℃温度下密封保存，得到浓度为1g/mL的氧化胆碱样品备用；

S3氨基酸样品的制备：将5g氨基酸粉末溶解于200mL超纯水中，震荡混匀，通过微孔滤膜过滤除菌，配制成浓度为25mg/mL浓缩存储液，分装冻存；

S4完全培养液的制备：向无菌蒸馏水中，依次加入步骤（2）中制备得到的氧化胆碱样品的制备、步骤（3）中制备得到的氨基酸样品、无机盐、偏多酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、硫胺素、步骤（1）中制备得到的葡萄糖样品和酚红，混合均匀。

6.根据权利要求5所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法，其特征在于：所述的步骤（1）中震荡时间为30~60s，所述震荡的速度为1800~1850rpm。

7.根据权利要求5所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法，其特征在于：所述的步骤（3）中震荡时间为20~40min，震荡速度为145~155rpm。