[发明专利]一种基于KASP的大鼠遗传质量监控SNP标记分型方法及试剂盒

权利要求书

1.用于扩增rs8161747位点的引物在F344、LEWIS、BN、Wistar四种大鼠SNP标记分型上的应用，其特征在于：所述的rs8161747位点标记信息为：位于1号染色体上RGSC6.0/rn6 第59715538bp；等位基因为C/T；

用于扩增rs8161747位点的引物包括两条等位基因特异性上游引物，分别为上游引物1和上游引物2，核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，还包括一条通用下游引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

上游引物1和上游引物2分别有FAM和HEX荧光信号识别区；

应用方法包括以下步骤：

（1）.样本收集：样本为4个近交大鼠品系：F344、LEWIS、BN、Wistar，每个品系各2只，将大鼠安乐死后，无菌采集鼠尾1-2cm、肾脏、肝脏、肺脏等组织，-20℃冻存备用；

（2）.基因组DNA提取：每个动物取30mg左右组织样本，参照组织基因组DNA提取试剂盒说明书提取基因组DNA，-20℃冻存备用；

（3）.配制10μL KASP反应体系：2×KASP Master Mix 5μL；0.14μL KASP引物组混合液，其中，上游引物1浓度为12μM，上游引物2浓度为12μM，下游引物浓度为15μM；将步骤（2）中提取得到的基因组DNA稀释至10ng/μL，补足余量；

（4）.进行KASP反应：94℃预变性15min；94℃20s，61℃1min，退火温度每个循环降0.6℃，10个循环；94℃20s，55℃1min，26个循环；94℃20s，57℃1min，12个循环；30℃30s，在QPCR仪上读取FAM和HEX荧光信号；

（5）.将得到的FAM和HEX信号与F344、LEWIS、BN、Wistar品系大鼠位于1号染色体上的rs8161747位点对应的碱基T、T、C、T进行比对，在rs8161747位点为C碱基的是BN大鼠。