[发明专利]一种积累大黄素的基因工程菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种能够积累大黄素的基因工程菌株，所述基因工程菌株的出发菌株为能够产生大黄素或其下游衍生物的土曲霉，其特征在于，所述基因工程菌株为将土曲霉中的O-甲基转移酶基因gedA进行突变而制备得到的基因工程菌株，所述突变包括通过基因缺失、基因插入或基因取代导致的基因功能全部失活的方式；所述能够产生大黄素或其下游衍生物的土曲霉为人工改造的土曲霉；所述人工改造的土曲霉通过以下任一方式或其组合来实现：

I、将土曲霉中ATEG_08453的原始启动子替换为强启动子，所述强启动子为启动子PgpdAt，PcitA，PgpdA，PtrpC，Pgpk，Pmpgd中的一种或任意几种；

II、在土曲霉中引入至少一个额外的ATEG_08453基因拷贝从而过表达ATEG_08453。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，在土曲霉中引入至少一个额外的ATEG_08453的基因拷贝从而过表达ATEG_08453通过以下任一方式或其组合来实现：

a、将ATEG_08453构建到表达载体中得到表达ATEG_08453的重组表达载体，将重组表达载体转入到土曲霉中，所述重组表达载体含有强启动子以启动ATEG_08453的表达，所述强启动子为启动子PgpdAt，PcitA，PgpdA，PtrpC，Pgpk，Pmpgd中的一种或任意几种；

b、将额外的ATEG_08453基因拷贝插入到土曲霉基因组中。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌株，其特征在于，所述b中，采用同源重组双交换的方式将额外的ATEG_08453基因拷贝插入到土曲霉基因组中。

4.根据权利要求2所述的基因工程菌株，其特征在于，所述将额外的ATEG_08453基因拷贝插入到土曲霉基因组中还包括利用强启动子启动额外的ATEG_08453的表达，所述强启动子为启动子PgpdAt，PcitA，PgpdA，PtrpC，Pgpk，Pmpgd中的一种或任意几种。

5.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述土曲霉选自土曲霉ATCC20542、CICC40205、NIH2624或NRRL1960。

6.根据权利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述土曲霉为土曲霉ATCC20542。

7.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述转录调控因子ATEG_08453如SEQ ID No. 5所示。

8.一种构建权利要求1-7任一所述的基因工程菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以土曲霉为出发菌株进行遗传操作的步骤。

9.权利要求1-7任一所述的基因工程菌株在生产大黄素或其下游衍生物中的应用。