[发明专利]一种可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）核层碳酸钙载药纳米粒子的制备

①将表面活性剂、助表面活性剂和油相混合得到油相体系，然后往油相体系中先后加入可溶性钙盐溶液和可溶性碳酸盐溶液进行反应，离心，洗涤，干燥后得到碳酸钙纳米粒子；所述的可溶性钙盐溶液和可溶性碳酸盐溶液组成水相体系；

②将步骤①中制得的碳酸钙纳米粒子分散在水中，然后加入药物并使之均匀分散，离心除去未负载的药物，干燥后得到碳酸钙载药纳米粒子Drug@CaCO₃ NPs；

（2）壳层透明质酸分子的聚乙二醇和甲基丙烯酸酐修饰

①将透明质酸HA溶于水中，加入EDC·HCl和NHS，活化HA分子链上羧基，加入甲氧基聚乙二醇胺CH₃O-PEG-NH₂使其氨基与HA分子链上的羧基进行反应，反应完成后透析，干燥后得到透明质酸-聚乙二醇聚合物HA-PEG；

②将步骤①中制得的HA-PEG溶于水中得到HA-PEG水溶液，加入甲基丙酸烯酐MA，调节pH为8～9，在低温下避光反应后在水中避光透析，干燥后得到甲基丙烯酯化的透明质酸-聚二乙醇衍生物mHA-PEG；

（3）核壳结构载药纳米粒子的制备

将步骤（1）中制得的Drug@CaCO₃ NPs分散于水中得到分散液；将步骤（2）中制得的mHA-PEG配成水溶液，将Drug@CaCO₃ NPs分散液加入到mHA-PEG水溶液中，避光搅拌，加入光引发剂，紫外光照进行交联，超声振荡后离心去除残留的mHA-PEG，干燥后制得核壳结构的可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子mHA-PEG/Drug@CaCO₃ NPs；

步骤（1）①中所述的表面活性剂为十二烷基溴化铵，所述的助表面活性剂为正丁醇，所述的油相为正己烷；所述的正丁醇与正己烷的体积比为5:27；

步骤（1）①中所述油相体系和水相体系的体积比为（32:1）～（320:1）；

步骤（1）①中所述的可溶性钙盐溶液和可溶性碳酸盐溶液按钙离子与碳酸根离子的摩尔比为1:1的配比进行加入；

步骤（1）②中所述的药物为阿霉素、拓扑替康、紫杉醇或其药用盐中至少一种；

步骤（1）②中所述的药物与碳酸钙纳米粒子的质量比为（2:1）～（0.5:1）；

步骤（2）①中HA和CH₃O-PEG-NH₂的摩尔比投料比为（1:1）～（3:1）；

步骤（2）①中所述的HA分子链上的羧基与EDC·HCl、NHS的摩尔比为1:3:3；

步骤（2）②中HA-PEG和MA的摩尔投料比为（1:1）～（1:6）；

步骤（3）中所述的Drug@CaCO₃ NPs和mHA-PEG质量比为（4:1）～（1:4）；

步骤（3）中所述的光引发剂与mHA-PEG的质量比为0.1%～0.5%。

2.根据权利要求1所述的可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子的制备方法，其特征在于：

步骤（1）①中制得的碳酸钙纳米粒子的粒径大小为50～300 nm；

所述的可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子mHA-PEG/Drug@CaCO₃ NPs的粒径大小为150～600 nm。

3.根据权利要求1所述的可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子的制备方法，其特征在于：

步骤（1）②中所述Drug@CaCO₃ NPs的载药量为20%～50%；粒径大小为100～450 nm；

步骤（2）①中所述的HA-PEG的PEG在HA高分子链上的取代度为10～30%；

步骤（2）②中所述的mHA-PEG的MA在HA-PEG分子链上的取代度为8～25%。

4.根据权利要求1所述的可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子的制备方法，其特征在于：

步骤（1）①中所述的可溶性钙盐为氯化钙，所述的可溶性碳酸盐为碳酸钠。