[发明专利]牛活体超排采卵方法和所用的制剂

说明书

本发明涉及牛活体超排采卵方法和所用的制剂。具体地说，一方面，本发明涉及FSH在制备用于牛活体采卵的制剂中的用途，所述制剂是包含牛促卵泡素浓度为25～50μg/ml的水溶液。另一方面，本发明涉及一种FSH制剂，其是包含牛促卵泡素浓度为25～50μg/ml的水溶液。所述牛活体采卵包括如下步骤：取卵前的超排处理、活体采卵、卵母细胞的检出。使用本发明方法进行牛活体采卵具有如说明书所述优异的技术效果，例如，与常规的方法相比，使用本发明方法能够获得大比例的可用卵母细胞数。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种改进的牛活体采卵方法，尤其是一种改进的牛活体超排采卵的方法，通过本发明方法能够获取显著更大量的卵母细胞数。本发明还涉及一种用于牛活体超排采卵的制剂，其中包含FSH。

背景技术

活体超排采卵，亦称超排采卵、超数排卵、超排等，该方法已应用于畜牧行业数十年，其基本原理是通过注射FSH(本领域通常亦称为follicle-stimulating hormone、卵泡刺激素、促卵泡素等)促使卵巢超量排放卵母细胞，进而提高畜牧育种的效率。超排采卵技术是利用外源激素，刺激动物在一个排卵周期排出比正常情况下更多的成熟卵子的技术，它和卵子收集技术是体外受精等胚胎工程研究的前提和基础。灵长类的超数排卵研究最早是在人上开展的。1970年，英国妇科学家StePtoe及胚胎学家Edwards开始人超数排卵、体外受精和胚胎移植的研究工作。1976年第一例输卵管妊娠成功。1978年StePtoe等报道了世界首例试管婴儿诞生。在非人灵长类，1973年，Gould等首先报道了岩石猴体外受精发育到卵裂。随后，在黑猩猩(Gould等，1983)，猕猴(Bavister等，1984)，狒狒(Kuehl等，1984)，食蟹猴(Bamaeede等，1984)，绒猴(Lopata等，1988)等均有报道。

活体超排采卵是JIVET(Juvenile In Vitro Embryo Transfer/Technology)技术即幼畜胚胎体外生产技术的有益补充，JIVET是集幼畜超数排卵与采卵、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植等技术为一体的生物高新技术体系。JIVET技术不仅可以极大提高动物的繁殖潜能，而且还可以缩短世代间隔，加速遗传改良进程。

牛是对人类的生产和发展提供非常强大的助力的动物，最初人们驯服野牛进行饲养是为了食肉增加营养，后来人们发现牛可以耕地，因此成为农民的帮手，促进了经济的发展和社会的进步，到了现代人们又发现牛乳是一种物美价廉且供给稳定的奶制品来源。因此饲养肉牛和奶牛成为一个非常重要的产业。但是牛相对于其它的牲畜，其生育能力有限，由此制约了畜牧业的快速发展。由此人们采用超排卵技术来促进牛的排卵数量。研究表明初生母牛有99％的有腔卵泡因发生闭锁而退化，只有1％的有腔卵泡在排卵时排出。闭锁卵泡就是因为未获取足够数量的促性腺激素所致。为此，我们可以利用超过体内正常量的外源性激素，来拯救99％的将要闭锁的卵泡，使其成为优势卵泡，而发育成熟、排卵，即在家畜发情的一定时期，注射FSH类的激素制剂，使其大量的卵泡不闭锁退化而进行正常发育、成熟，在排卵前LH类激素和前列腺素来补充内源性激素的不足，以确保所有的卵泡均能成熟、破裂和排卵。

牛体外胚胎生产技术的研究源于20世纪50年代，Black等给未成年的小牛注射促性腺激素后，诱发了卵巢卵泡发育并获得发育正常的卵子，从而证明激素诱导也能使犊牛卵泡发育、排卵和受精。之后，很多学者就犊牛卵母细胞的发育能力进行了大量研究。20世纪90年代以后，人们对犊牛卵泡发育及胚胎体外培养进行了更为深入的研究。Armstrong等(1997)指出，无论是犊牛还是成年牛，卵母细胞在体外培养都能发育到囊胚，移植后都可以妊娠。Maneesh等(2000)对2～3月龄犊牛重复诱导采卵，结果指出供体牛在15月龄后繁殖性能基本正常，说明对犊牛进行激素处理、超排采卵对其发育影响不大或者没有影响。2005年Kauffold等首次报道，未经激素处理的不到2月龄的犊牛卵母细胞能够发育到囊胚，移植后产下正常犊牛。