[发明专利]一种小鼠胚胎移植保存工具及其制造方法

说明书

一种小鼠胚胎移植保存工具及其制造方法，包括离心管、注射器、橡胶活塞和巴斯德管，所述橡胶活塞从尾部塞入注射器外套，适当剪掉注射器外套锥头一部分体积，使锥头口宽度等于巴斯德管外径宽度，适当剪掉注射器外套两侧翼，使两翼长度等于或者略大于离心管直径，把注射器外套插入离心管中，固定外套，使外套在离心管中不能左右上下移动，巴斯德管固定在外套的锥头。采用本发明能够使移植胚胎在体外环境中得到有效保存，缩短胚胎在体外低温低湿时间利于胚胎着床和后期发育。

技术领域

本发明涉及小鼠胚胎移植保存器械技术领域，具体是一种小鼠胚胎移植保存工具及其制造方法。

背景技术

胚胎移植对于转基因克隆动物能否成功扮演至关重要的作用。胚胎移植需要合适情期的受体雌性小鼠，早期胚胎移入小鼠不同部位将导致不同的妊娠结果。胚胎从培养箱取出到移植入受体雌性小鼠输卵管或子宫的过程中将受到外界低温低湿环境刺激，将极大影响胚胎的发育效率以及最终的妊娠结果。胚胎移植成功与否关键在于合适情期的受体小鼠和恰当的移植部位以及适宜的体外环境过渡保存方案。

胚胎移植前需要合适情期的假孕受体雌鼠或正常交配受体雌鼠。假孕受体雌鼠或正常交配受体雌鼠的制备方案一般为两步超排发情法，受体雌鼠腹腔注射5IU PMSG，48小时后注射5IU HCG。随后，雌鼠与结扎的公鼠合笼交配即为假孕受体母鼠，雌鼠与未结扎公鼠合笼交配过夜即为正常受体母鼠；第二天早上检查阴道栓状态，见栓后则可认为构建假孕受体母鼠或正常交配受体母鼠成功。雌鼠与正常公鼠或结扎公鼠合笼交配，经交配刺激可以诱使雌鼠产生妊娠黄体，改变生殖道生理状态为囊胚着床和持续妊娠做准备。常规胚胎移植方案使用1细胞期、2细胞期、桑椹胚期和囊胚期胚胎，对应移植入输卵管膨大部、输卵管第1到2个大弯之间、子宫体。目前普遍使用方案是1细胞期胚胎移入受体雌鼠输卵管膨大部或输卵管第1到第2个大弯之间。

当准备好受体母鼠和移植用胚胎，胚胎从培养箱取出到移植入受体雌鼠输卵管或子宫过程内，暴露在体外低温、低湿环境中较长时间，随后再移入有一定湿度和温度的母体内。胚胎在离体环境和离开培养箱的环境中需要暂时保存，如不能保持体外保存的温度湿度，将会严重降低胚胎发育率。手术操作和移植操作的不同步性，将严重影响移植的最终妊娠结果。胚胎暂时体外保存不仅有利于手术和移植操作同步，还可减少胚胎暴露在体外低温、低湿环境的时间。

两步超排法为目前超数排卵常用方法，可以有效促使雌鼠发情，提高情期内排卵数，可有效诱发假孕受体母鼠发情并促进与公鼠交配。正常公鼠与发情母鼠交配后受精卵可以按照情期自然下行到子宫正常附着；假孕受体母鼠与结扎公鼠交配可以促使妊娠黄体的产生和生殖道变化，受精卵同样会从输卵管下行到子宫，但由于小鼠发情时间、受精和移植受精卵的细胞期以及不同的移植部位，都将会导致囊胚到达子宫时间与正常受精卵到达子宫时间存在差异。如果是结扎公鼠与受体母鼠交配，囊胚过早到达子宫将不能附植；囊胚晚于正常时间到达子宫，妊娠黄体将会退化导致囊胚不能附植；当囊胚在正常时间到达才能附植于子宫，最终妊娠生出小鼠。结扎公鼠与受体母鼠交配，无论囊胚晚到或者早到子宫都不能妊娠，胚胎发育期与母鼠情期不对应是妊娠率低和出生小鼠率低的原因。超排雌鼠与正常公鼠交配虽然可以提高交配见栓率，但将会产生更多受精卵附植到子宫，导致受体母鼠过度刺激或移植胚胎不能附植导致最终移植胚胎附植失败。

当准备好受体母鼠和移植用胚胎，胚胎移植需要与手术操作相配合，胚胎过早取出没有合适的体外培养条件，胚胎在体外低温低湿环境将极大影响胚胎发育效率；如果胚胎过晚取出将导致受体母鼠生殖系统在体外过长时间，使得生殖系统受到损伤而影响妊娠效果；实际操作中只有可能是胚胎过早或者过晚拿出培养箱，这些影响胚胎移植最终的妊娠结果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是进行移植时胚胎在体外低温低湿环境暂时保存的问题。提供一种小鼠胚胎移植保存工具及其制造方法，能够使移植胚胎在体外温湿度合适的条件下暂时保存，减少手术操作导致生殖系统暴露于体外的时间，避免体外低温低湿造成胚胎发育率下降，以达到胚胎体外移植与手术操作相协调。