[发明专利]一种防治莴苣菌核病的生防制剂及其制备和使用方法

说明书

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种防治莴苣菌核病的生防制剂及其制备方法。本发明的生防制剂包括以重量份计的以下成分：银杏内生真菌粉红螺旋聚孢霉发酵液15‑35份、银杏叶提取物10‑20份和银杏外种皮提取物15‑25份；将粉红螺旋聚孢霉经固体培养和液体培养制备得到的发酵液、银杏叶提取物和银杏外种皮提取物按所述重量份混合即得到所述生防制剂。本发明采用粉红螺旋聚孢霉发酵液、银杏叶提取物和银杏外种皮提取物作为活性成分以一定比例进行复配，与单一成分相比能显著提高防效，还能促进莴苣幼苗生长，既能明显抑制莴苣菌核病的发生，又可避免化学防治易产生抗药性和危害环境的技术问题，具有一定的应用前景。

技术领域

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种防治莴苣菌核病的生防制剂及其制备方法。

背景技术

莴苣是我国的重要蔬菜作物，菌核病是莴苣上的常发性病害，其病原菌为核盘菌，该病菌导致的菌核病一旦发作常会连年发生，导致莴苣的产量和品质严重下降，造成经济损失。核盘菌寄主范围广，在病残体上形成的菌核抗逆性强，子囊孢子可随田间气流进行近距离扩散传播，这些特性导致菌核病的防治相当困难。对于菌核病的防治，目前还没有真正经济、有效的防治措施，在实际生产中主要靠化学农药和栽培措施防治。

防治菌核病的杀菌剂有多菌灵、农利灵、速克灵等单剂以及二十多种复配制剂，但是由于施药不便，加上核盘菌散发子囊孢子历期长，药剂的有效保护期有限，而且由于核盘菌抗药性、农药残留对环境和人畜造成危害等问题的出现，农药的应用受到了限制。栽培防治措施中水旱轮作是最有效的降低初侵染源的防病措施，但是水早轮作只减少了本地的菌源，无法阻止借风传播而来的外来菌源，因而，单靠这种措施往往防效不稳定。选育和利用抗病品种来防治莴苣菌核病的措施虽然有效，但目前尚未发现真正的抗病品种或资源，这一方面工作目前还处于实验室研究阶段，在生产中应用还需一段时间。生物防治研究中发现粉红螺旋聚孢霉能够寄生于核盘菌属真菌，对核盘菌病害有一定的抑制作用，但未能大面积推广使用，其在实际生产应用中往往存在生产性能欠佳、多种复杂因素导致防效不稳定等问题。

发明内容

针对以上技术问题，本发明的目的是提供一种防治莴苣菌核病的生防制剂及其制备和使用方法，采用粉红螺旋聚孢霉发酵液、银杏叶提取物和银杏外种皮提取物作为活性成分进行复配，与单一成分相比能显著提高防效，还能促进莴苣幼苗生长，既能明显抑制莴苣菌核病的发生，又可避免化学防治易产生抗药性和危害环境的技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

首先，本发明提供一种防治莴苣菌核病的生防制剂，所述生防制剂包括以重量份计的以下成分：银杏内生真菌粉红螺旋聚孢霉发酵液15-35份、银杏叶提取物10-20份和银杏外种皮提取物15-25份。

优选地，所述生防制剂包括以重量份计的以下成分：银杏内生真菌粉红螺旋聚孢霉发酵液25份、银杏叶提取物15份和银杏外种皮提取物20份。

其次，本发明提供上述防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)将活化培养后的粉红螺旋聚孢霉接种至PDA平板中央，放置在28℃恒温培养箱中培养2-3d，然后将经过纯化的粉红螺旋聚孢霉的菌饼接种至PDB液体培养基中，于恒温摇床上培养2-3d，得到所述粉红螺旋聚孢霉发酵液；

(2)将银杏叶干燥后粉碎过40-60目筛，再放入提取罐中，同时加入体积浓度为60-80％的乙醇提取2-3次，每次提取60-70min，合并提取液；将提取液减压蒸馏至原体积的1/5-1/10，得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12-15h，取上清液；将上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用含乙酸的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸馏得到流浸膏，流浸膏减压干燥，得到所述银杏叶提取物；