[发明专利]VAV3基因甲基化检测试剂盒及其应用

说明书

本发明发现了可以用于结直肠癌诊断的生物标志物，提供了一种可以用于结直肠癌检测的试剂盒，该试剂盒可以用于结直肠癌诊断的诊断中。VAV3基因甲基化检测试剂盒,VAV3基因甲基化检测试剂盒包含VAV3基因甲基化特异性引物和VAV3基因甲基化特异性荧光探针，VAV3基因甲基化特异性引物为VAV3_F和VAV3_R，VAV3_F序列如SEQ ID No.1:5’‑TGCGGATCGTAGCGAGATCG‑3’；VAV3_R序列如SEQ ID No.2:5’‑TCCCGCGCGCTCTCCGTACG‑3’；VAV3基因甲基化特异性荧光探针为VAV3_P，VAV3_P序列如SEQ ID No.3:5’‑TCGACGACGACTACCGCGCA‑3’。

技术领域

本发明属于分子和细胞生物学领域，特别涉及基因甲基化检测。

背景技术

GDNF家族受体α-1(GFRα1)，也被称为GDNF受体，是一种蛋白质，在人中由GFRA1基因编码，GFRA1被认为是原癌基因。

而结肠直肠癌(carcinoma of colon and rectum)胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。

我国结直肠癌的发病率和死亡率均保持上升趋势。2015中国癌症统计数据显示我国结直肠癌发病率、死亡率在全部恶性肿瘤中均位居第5位，其中新发病例37.6万，死亡病例19.1万。其中，城市地区远高于农村，且结肠癌的发病率上升显著。近年来,随着人民生活水平的不断提高,饮食习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化,我国结直肠癌(colorectalcancer,CRC)的发病率和死亡率均保持上升趋势。其中,结肠癌的发病率上升尤为显著。大多数患者发现时已属于中晚期。结肠直肠癌的早期筛查和诊断对结肠直肠癌的诊疗工作极为重要。

目前一些基于粪便甲基化基因检测的方法，进行结直肠癌早期筛查，目前已取得成就，证明其可以有效发现结直肠癌及其癌前病变，成功地为结直肠癌的防治提供一项新的技术。但目前可以用于检测位点仍不够丰富，检测位点较为单一。

发明内容

为进一步为结直肠癌诊疗提供可用的检测试剂,提高医疗机构结直肠癌诊疗水平,改善结直肠癌患者预后。

我们发现，VAV3基因甲基化与结直肠癌有关。我们测定了20例结直肠癌组织中VAV3基因甲基化情况，结果20例结直肠癌组织中19例存在VAV3基因甲基化，结直肠癌组织中GFRA1基因甲基化比例为95％。因而认为GFRA1基因甲基化可以作为用于结直肠癌诊断的生物标志物。该试剂盒可以用于结直肠癌诊断的诊断中。

根据本发明的一方面，提供了VAV3基因甲基化检测试剂盒,VAV3基因甲基化检测试剂盒包含VAV3基因甲基化特异性引物和VAV3基因甲基化特异性荧光探针，VAV3基因甲基化特异性引物为VAV3_F和VAV3_R，

VAV3_F序列如SEQ ID No.1:5’-TGCGGATCGTAGCGAGATCG-3’；

VAV3_R序列如SEQ ID No.2:5’-TCCCGCGCGCTCTCCGTACG-3’；

VAV3基因甲基化特异性荧光探针为VAV3_P，

VAV3_P序列如SEQ ID No.3:5’-TCGACGACGACTACCGCGCA-3’。

根据本发明的一方面，提供了VAV3基因甲基化检测试剂盒还包含内参基因GAPDH基因，GAPDH基因的GAPDH基因甲基化特异性引物如下：

GAPDH_F序列如SEQ ID No.4：5’-TGGGGTGGTATAGTGGGGTGGTG-3’；