[发明专利]一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉液体发酵方法及制剂的制备方法

权利要求书

1.一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉液体发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、斜面培养，将哈茨木霉出发菌株M-17菌种接种到PDA培养基斜面上进行培养；

步骤二、种子液培养，将步骤一培养好的斜面菌种接种到灭菌的种子培养基中进行培养；

步骤三、液体发酵，将步骤二培养好的种子液接种到灭菌的液体发酵培养基中进行培养，得到哈茨木霉发酵物；

步骤四、制剂制备，将步骤三发酵结束的液体发酵液制备成液体制剂或固体制剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤一中PDA培养基制作方法为：

1)先按以下配比称取培养基各组分：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml；

2)土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20～30min，用2层纱布趁热根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤在量杯上过滤，滤渣弃取，滤液补充蒸馏水分到1000ml；

3)把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，待琼脂完全溶解后，进行分装，121℃灭菌25～30min后自然冷却倒斜面和平板，凝固后备用。

3.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤一斜面培养条件为黑暗条件下，25～28℃培养5～7d。

4.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤二中种子培养基为蔗糖15～20g/L，酵母粉3～6g/L，NaCl 0.01～0.05g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1～0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2～1.5g/L，KH₂PO₄ 3.5～4.5g/L，NaNO₃ 6.5～7.0g/L；培养基湿热灭菌条件为121℃，25～30min；接种量为1～2cm²斜面孢子；培养条件为黑暗条件下在摇床25～28℃培养3～6d，摇床转速180～220rpm。

5.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤三中液体发酵培养基为碳源添加量为2％的小麦粉、玉米粉、马铃薯全粉、马铃薯淀粉、可溶性淀粉和麸皮粉中的一种或几种；氮源添加量为2％的黄豆粉、葡萄酒皮渣粉、硝酸铵、尿素、硫酸铵和硝酸钠中的一种或几种；其他微量元素添加量为1.4％的硫酸镁、硝酸钙、硫酸亚铁中的一种或几种；生长促进剂为甘草和板蓝根浸出液中的一种或几种，浓度分别为30％、50％、70％。

6.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉的液体发酵方法，其特征在于，步骤三中液体发酵培养基灭菌参数为蒸汽湿热灭菌，121～124℃维持25～35min，培养条件为25～28℃培养，通风比1:0.7v/v，开搅拌90～115rpm，培养10～13d。