[发明专利]一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法

权利要求书

1.一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法，其特征在于，该方法使用特异性核酸酶结合RNA特异性荧光染料定量检测RNA，具体为：特异性核酸酶消化DNA保留RNA，消除相对高浓度DNA的干扰，然后使用RNA特异性荧光染料定量检测RNA残留，计算消化前后差值来定量检测RNA残留；步骤如下：

1）配制各实验组：

Mock组：10µL TE Buffer（RI），10µL DNase I Mix；

pDNA（RNA）组：10µLpDNA（RNA），10µL DNase I Mix；

pDNA组：10µLpDNA，10µL DNase I Mix；

37℃消化30min；

其中，所需样品/对照品如下：

10ng/µL RNA：1µLE. coli Total RNA，1µL RNase Inhibitors，98µLTE Buffer（RI）；

pDNA（RNA）：1µLE. coli Total RNA，1µL RNase Inhibitors，98µL pDNA；

pDNA：1µL RNase Inhibitors，99µL pDNA；

TE Buffer（RI）：99µL TEBuffer，1µLRNase Inhibitor；

DNase I Mix：3.2µL DNase I，16µL 10X Reaction Buffer with MgCl₂，0.8µL RNaseInhibitors，60µL H₂O（Nuclease-Free）；

2）各取10µL反应液与Qubit Working Solution混合，室温静置5min，Qubit 4型荧光定量仪以RNA HS模式读取RFU，各组分别读取2次，余下反应液进行AGE定性检测；

3）计算消化前后差值来定量检测RNA残留，使用如下公式即得到DNA样品中RNA残留量：

。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性核酸酶为DNase I和RNaseInhibitors的混合物，DNase I终浓度为1U/µL，所述RNA特异性荧光染料为QubitRNAHS试剂盒。