[发明专利]一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用

说明书

本发明公开了一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用，属于生物医学技术领域。抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体特异性地识别禽流感病毒神经氨酸酶蛋白N2，具有抑制神经氨酸酶活性和中和病毒能力。本发明还克隆了抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体的轻、重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认了基因序列和氨基酸序列的唯一性。本发明涉及的单克隆抗体、可变区基因及氨基酸序列可用于N2的禽流感病毒的诊断和治疗药物研发等，具有广泛的临床应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及特异性识别禽流感病毒神经氨酸酶N2、具有抑制神经氨酸酶活性功能和中和病毒能力的单克隆抗体及其轻、重链可变区基因以及应用。

背景技术

禽流感是由A型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的急性高度接触性传染病。A型流感病毒基因组分为八个节段组成，包括PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS。血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是位于流感病毒囊膜表面的糖蛋白，是病毒亚型和毒株分类的重要依据。目前已知A型流感病毒有16个HA亚型(H1～H16)，10个NA亚型，在流感病毒复制过程中容易发生重组产生新的亚型毒株。H9N2亚型禽流感病毒在禽类中广泛分布，为流感病毒的变异和重组提供了有利的条件。H9N2亚型流感病毒对禽类呈现低致病力，感染禽时仅表现轻微的呼吸道症状。产蛋禽感染则表现产蛋下降，甚至产蛋完全停止。但是，H9N2亚型流感病毒容易与其他致病菌和病毒发生协同作用，造成混合感染和继发感染使得发病率和死亡率显著提升。此外，H9N2亚型流感病毒可以通过病毒受体位点突变，从而突破宿主屏障感染哺乳动物和人。同时，已有报道H9N2亚型流感病毒为高致病性流感病毒提供内部基因。因此，H9N2流感病毒对人类生产和自身健康都有着潜在威胁。

NA具有神经氨酸酶活性，可以水解细胞表面受体特异性糖蛋白的N-2酰基神经氨酸，利于流感病毒粒子的成熟和释放。目前人类临床上常用抗流感病毒药物主要为干扰病毒M2蛋白功能的金刚烷胺,以及包括奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦和拉尼那米韦在内的神经氨酸酶抑制剂。然而，随着抗流感病毒药物的广泛应用，药物的副作用和病毒耐药问题日趋严重。因此，研制具有抑制H9N2流感病毒神经氨酸酶活性的中和抗体，不但能够为流感病毒的诊断提供新方法，也将为设计预防和治疗N2亚型流感病毒感染的药物提供新思路。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供了一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用，获得了该抗体轻、重链可变区基因序列和氨基酸序列。该抗体代号为N2-QW，N2-QW单克隆抗体具有神经氨酸酶抑制效果。N2-QW单克隆抗体具有体外抑制病毒复制能力。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体，该抗体包含：重链和轻链；

所述的重链和轻链均包括可变区，该可变区包括互补决定区；

所述重链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用HCDR1、HCDR2、HCDR3表示；

所述轻链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用LCDR1、LCDR2、LCDR3表示，其特征在于，HCDR1、HCDR2、HCDR3的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；LCDR1、LCDR2、LCDR3的序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示。

优选的，重链可变区的序列如SEQ ID NO.19所示，轻链可变区的序列如SEQ IDNO.20所示。

所述的单克隆抗体重链为1gG1亚型，轻链为Kappa型。