[发明专利]一种利用桃蚜获取马铃薯卷叶病毒属芸薹黄化病毒的方法

说明书

本发明涉及一种利用桃蚜(Myzus persicae)获取马铃薯卷叶病毒属芸薹黄化病毒(Brassica yellows virus，BrYV)的方法，具体步骤为：S1：获得携带芸薹黄化病毒的病毒转基因植株；S2：获得饲毒用无毒蚜虫；S3：用所述无毒桃蚜从含有病毒基因组的转基因植株和冷冻病叶中获得病毒；S4：检测获毒后所述桃蚜的传毒能力。采用本发明建立的芸薹黄化病毒等马铃薯卷叶属病毒获毒方法可以很好地克服采用患病植株饲毒桃蚜中存在的植株难以长期保存、占用空间、不便于运送和毒源易混杂等的技术瓶颈，拓宽了介体昆虫获毒及品种抗性鉴定等的简便性、快速性和可靠性。

技术领域

本发明属于农业科学技术领域，研究出一种利用桃蚜(Myzus persicae)从转病毒全长cDNA基因拟南芥植株及冷冻病叶中获得马铃薯卷叶病毒属芸薹黄化病毒(Brassicayellows virus，BrYV)的方法。

背景技术

芸薹黄化病毒(BrYV)是马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)一种新发现的病毒，也有学者将其称为芜菁黄化病毒(Turnip yellows virus)的一个株系，在中国大陆11个省市均有分布，BrYV主要侵染卷心菜(Brassica oleracea var.capitata)、大白菜(B.pekinensis)、菜花(B.oleracea var.botrytis)、芥菜(B.juncea)、萝卜(Raphanussativus var.oleifera)等多种十字花科作物，在田间引起作物黄化和叶片卷曲症状(Xiang et al.,2011)。Wang等报道该病毒还能侵染田间茄科植物烟草(Nicotianatabacum L.)(Wang et al.,2015)。该病毒主要有三种基因型：BrYV-A，BrYV-B和BrYV-C(Xiang et al.,2011；Zhang et al.,2014)，一致性在93％左右。Zhang等(Zhang et al.,2015)分别构建了这三种基因型的全长侵染性cDNA克隆，能够系统侵染本生烟。Chen等(Chen et al.,2018)成功将BrYV-C型病毒全长cDNA转入拟南芥获得稳定遗传转病毒基因组拟南芥株系，分别命名为BrYV^111#和BrYV^412#。转化BrYV全长的拟南芥株系表现出一系列与Col-0野生型拟南芥不一致的发育表型，例如：植株矮化、顶端优势丧失、腋生叶增多、果荚变短和叶片变紫等症状。这与病毒自然情况下侵染症状基本一致，并且病毒转基因拟南芥植株BrYV能够正常复制和表达蛋白。

马铃薯卷叶属病毒(Poleroviruses)为正义单链RNA(+ssRNA)病毒，病毒粒子为球形，直径约为25-35nm，无包膜，病毒粒子由外壳蛋白和病毒基因组RNA(genomic RNA,gRAN)组成。Polerovirus在世界范围内分布广泛，可以侵染十字花科、藜科、葫芦科、禾本科等多种植物，引起严重病害和经济损失。马铃薯卷叶病毒属病毒侵染时局限于寄主植物组织的韧皮部，病毒不能机械接种，只能通过介体蚜虫以持久非增殖型方式、农杆菌浸润或者嫁接等方式进行传播(Domier,2011；Mayo and Ziegler-Graff,1996；Taliansky et al.,2003)。