[发明专利]一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用

说明书

本发明属于植物提取技术领域，具体地说是一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，包括以下步骤：（1）将荷叶去除杂质后烘干，粉碎；（2）在粉碎后的荷叶粉中加入复合酶，搅拌；（3）将步骤（2）所得混合物调pH为4.1‑6.8，置于超声清洗器中超声辅助酶解；（4）酶解后的混合物加入回流提取器中，回流提取，过滤，得提取液；（5）将提取液经减压浓缩，脱色，萃取，减压蒸干乙醇后，得荷叶碱的粗提取物；（6）将荷叶碱的粗提取物通过阳离子交换树脂洗脱，收集洗脱液，萃取，结晶，即得高纯度荷叶碱。本发明能大幅度缩短提取时间，提高提取效率，荷叶碱粗提物通过阳离子交换树脂进行纯化后纯度更高。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体地说是一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。

背景技术

荷叶是睡莲科植物莲的干燥叶，具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血的功效。《本草纲目》中记载，荷叶能“生发元气，裨助脾胃，涩精浊，散瘀血，清水肿、痈肿，发痘疮。治吐血、咯血、衄血、下血、血淋、崩中、产后恶血、损伤败血”。荷叶中含有生物碱及黄酮类等多种活性成分，现已被卫生部列入“药食同源”范畴内。现代研究表明，荷叶具有多种药理活性，如降脂减肥、抗氧化、降血糖、抗菌等作用。荷叶碱是荷叶中一种阿朴啡型生物碱，是荷叶中降脂的主要活性成分，能通过激活AMP-活化蛋白激酶促进脂肪连接蛋白的表达，从而加速3T3-L1脂肪细胞中葡萄糖的消耗；通过降低Per-Amt-Sim激酶表达，抑制油酸诱导的HepG2肝性脂肪变性细胞模型中的脂肪生成；通过AMPK通路促进GLUT4的转运和表达，影响葡萄糖的吸收水平，降低血糖。

随着现代饮食结构改变，肥胖及血脂代谢异常的患者越来越多，动脉粥样硬化、冠心病及脑卒中等心脑血管疾病的发病机率逐年升高并趋于年轻化，因此使用荷叶碱达到控制血脂和减肥的目的备受关注，市场对荷叶碱的需求大幅增长，但目前荷叶碱的提取效率低，操作程序复杂，耗时长，价格昂贵，限制了荷叶碱的开发和应用。

生物碱类物质属于植物的次生代谢产物，主要存在于植物细胞内，因此，要达到高效提取目的，破坏植物细胞壁，使有效成分快速溶出是提取的关键因素。植物细胞主要由细胞壁和原生质体组成，而在死细胞中，原生质体大都破裂，浸提的阻力主要来源于细胞壁，在提取过程中，当细胞内的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。近年来，纤维素酶和果胶酶在提取中的应用极大的克服了提取过程中细胞壁的阻力。纤维素酶和果胶酶作用于植物材料，能使细胞壁及其间质结构产生局部的疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从细胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度提高有效成分的提取率。

发明内容

为了解决现有荷叶碱提取效率低等技术问题，本发明提供了一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。

本发明提供的技术方案为：

一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，包括以下步骤：

(1)将荷叶去除杂质后烘干，粉碎，得到荷叶粉；

(2)在粉碎后的荷叶粉中加入复合酶，搅拌均匀，得到混合物；

(3)将步骤(2)所得混合物调pH为4.1-6.8，置于超声清洗器中超声辅助酶解10-120min，得到酶解混合物；

(4)将步骤(3)所得酶解混合物加入回流提取器中，然后加入8-20倍量45-75％乙醇溶液，回流提取20-120min，过滤，得提取液；

(5)将步骤(4)的提取液经减压浓缩回收乙醇，脱色，再经55％乙醇溶液萃取，减压蒸干乙醇后，得荷叶碱的粗提取物；

(6)将荷叶碱的粗提取物通过阳离子交换树脂洗脱，洗脱液中乙醇浓度为45％，NaOH浓度为3.7％，收集洗脱液，石油醚萃取，结晶，即得高纯度荷叶碱。