[发明专利]一种单环刺螠幼虫的RNA干扰方法

说明书

本发明提供了一种单环刺螠幼虫的RNA干扰方法，属于基因干扰技术领域。所述RNA干扰方法包括如下步骤：(1)取单环刺螠幼虫正常饲养状态下的养殖水体，用筛绢过滤养殖水体中的海水，得到幼虫密度为15～60只/毫升的浓缩水体；(2)将所述浓缩水体与目的基因双链RNA混合，使目的基因双链RNA的终浓度为0.03～0.3微摩尔/升，静置6～15小时，得到干扰水体；(3)向所述干扰水体中添加过滤海水至步骤(1)所述正常状态下的养殖水体，继续饲养，所述继续饲养的时间≥2天。本发明提供的RNA干扰方法能有效干扰单环刺螠幼虫的目的基因表达，有助于单环刺螠基因功能的研究。

技术领域

本发明涉及基因干扰技术领域，具体涉及一种单环刺螠幼虫的RNA干扰方法。

背景技术

许多无脊椎动物在其早期发育过程中要经历一到多个幼虫阶段，幼虫经过变态方能形成与成体形态、生理和生态习性基本一致的特征，此过程涉及了一系列基因的网络调控，且因物种或者生理过程的不同而异。螠虫动物具有独特的发育特征与进化地位，例如：其担轮幼虫结构较其他冠轮动物担轮幼虫的结构更复杂，持续时间更长；其体节幼虫具有幼虫体节，该幼虫体节是螠虫动物重要的进化特征之一，较典型体节动物的体节结构简单且持续时间短，等等。然而，目前由于世界范围尚无任何螠虫动物幼虫基因功能的研究平台，大大限制了人们探知这些特征分子机制的研究进展。

发明内容

有鉴于背景技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种单环刺螠幼虫的RNA干扰方法，旨在构建单环刺螠幼虫的RNA干扰技术，为其基因功能研究搭建平台。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种单环刺螠幼虫的RNA干扰方法，包括如下步骤：

(1)取单环刺螠幼虫正常饲养状态下的养殖水体，用筛绢过滤养殖水体中的海水，得到幼虫密度为15～60只/毫升的浓缩水体；

(2)将所述浓缩水体与目的基因双链RNA混合，使目的基因双链RNA的终浓度为0.03～0.3微摩尔/升，静置6～15小时，得到干扰水体；

(3)向所述干扰水体中添加过滤海水至步骤(1)所述正常状态下的养殖水体，继续饲养，所述继续饲养的时间≥2天。

优选的，所述单环刺螠幼虫为担轮幼虫。

优选的，当所述单环刺螠幼虫为担轮幼虫时，步骤(1)所述浓缩水体的幼虫密度为40～60只/毫升。

优选的，当所述单环刺螠幼虫为担轮幼虫时，步骤(2)所述静置的时间为6～12小时。

优选的，所述单环刺螠幼虫为体节幼虫。

优选的，当所述单环刺螠幼虫为体节幼虫时，步骤(1)所述浓缩水体的幼虫密度为25～60只/毫升。

优选的，当所述单环刺螠幼虫为体节幼虫时，步骤(2)所述静置的时间为10～15小时。

优选的，步骤(2)所述目的基因包括Msx、Lox5和Antp中的一种或多种。

优选的，当所述目的基因为Msx基因时，所述目的基因双链RNA的终浓度为0.1～0.2微摩尔/升；当所述目的基因为Lox5基因时，所述目的基因双链RNA的终浓度为0.05～0.1微摩尔/升；当所述目的基因为Antp基因时，所述目的基因双链RNA的终浓度为0.05～0.1微摩尔/升。

本发明还提供了上述的RNA干扰方法在担轮幼虫的RNA干扰中的应用；所述担轮幼虫优选包括软体动物的担轮幼虫和/或环节动物的担轮幼虫。

优选的，当步骤(3)所述继续饲养的时间7天时，按顺序重复步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)的操作。