[发明专利]重组argF蛋白纳米微粒的制备及应用

权利要求书

1.重组argF蛋白纳米微粒在制备预防结核病疫苗中的应用，其特征在于，所述重组argF蛋白纳米微粒的制备方法，具体包括如下操作步骤：

(1)扩增M.bovis的MB1684基因，构建重组表达质粒pProEx-MB1684，将重组表达质粒转化到BL21感受态细胞获得重组菌，用IPTG诱导使重组菌表达argF，采用亲和层析法对表达的argF进行纯化，透析去盐，冻干，获得重组蛋白argF；

(2)将冻干的所述重组蛋白argF粉末溶解于PBS溶液中作为内水相；

(3)称取PLGA，溶于乙酸乙酯中，作为油相备用；

(4)配制1％PVA水溶液作为外水相，0.5％PVA水溶液作为扩散相；

(5)将所述内水相缓慢滴加到所述油相中，冰浴下60W功率超声形成初乳，其中所述内水相和所述油相比例为1：9；

(6)随后将步骤(5)中形成的所述初乳逐滴加入到所述外水相溶液中，冰浴下100W功率超声形成复乳；

(7)将所述步骤(6)形成的复乳体系滴加到所述扩散相中，放置于磁力搅拌器上，700rpm室温下持续搅拌4h，使有机溶剂充分扩散到所述扩散相中，从而固化聚合物乳滴；

(8)向步骤(7)形成的乳液加入6-10倍体积的灭菌蒸馏水，5000rpm，4℃离心3min，洗涤两次，即可得到重组argF纳米微粒乳液，所述重组argF蛋白纳米微粒是由PLGA包被重组argF抗原获得，包封率为76％，平均粒径为186.6nm，电位为-28.8mV，所述重组argF蛋白纳米微粒能够增强BCG的免疫活性。