[发明专利]一种获取年龄、预测肿瘤疾病发生的实时荧光PCR试剂盒

权利要求书

1.一种获取年龄、预测肿瘤疾病发生的实时荧光PCR试剂盒，包括：引物如SEQ IDNO.1-48所示。

2.一种实时荧光PCR试剂盒的应用，所述应用用于非诊断目的，具体为：

（1）提取个体样本的DNA，进行DNA甲基化的亚硫酸氢盐修饰；

（2）获得DNA的hTERT基因启动子区域CpG位点甲基化程度，通过建立的CpG位点甲基化程度与人的年龄、肿瘤疾病预测的回归模型；其中CpG位点为CpG2、CpG5和CpG8三个位点，和/或CpG1、CpG3、CpG4、CpG6和CpG7五个位点；

所述步骤（2）中获得DNA的hTERT基因启动子区域CpG位点甲基化程度具体为：通过甲基化特异性聚合酶链反应和/或Real-time绝对定量PCR获得；所述甲基化特异性聚合酶链反应，扩增引物如SEQ ID NO.1-32所示；Real-time 绝对定量PCR过程均采用八对hTERT基因启动子区域扩增引物如SEQ ID NO.33-48所示。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述步骤（2）中建立CpG位点甲基化程度与人的年龄、肿瘤疾病预测的回归模型具体为：

Y₁=187.043-120.054×A-60.363×B+132.123×C；

其中A、B、C分别代表CpG2、CpG5和CpG8的甲基化率；Y₁代表的是甲基化率；

Y₂=181.578-132.299×D-45.963×E-49.239×F+90.884×G+49.320×H；

其中E、F、D、G、H分别代表CpG1、CpG3、CpG4、CpG6和CpG7的甲基化率，Y₂代表的是年龄。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述当Y₁≤50则为正常细胞；当Y₁50，则为肿瘤细胞。