[发明专利]基于模式生物的药物抗过敏功效评价方法

说明书

本发明提供的基于模式生物的药物抗过敏功效评价方法，包括S1、配制药物溶液和Compoud 48/80溶液；S2、挑选发育正常的模式生物，向药物处理组加入药物溶液、模型对照组和溶剂对照组中加入蒸馏水，孵育；S3、药物处理组、模型对照组中加入Compoud 48/80溶液，溶剂对照组加入蒸馏水，孵育；S4、药物处理组、模型对照组和溶剂对照组中分别取溶液置于EP管中，并加入BAPNA溶液，孵育；S5、检测OD405吸光值；S6、计算Tryptase表达水平和抑制率；S7、比较各组Tryptase的表达水平和抑制率，确定样品的抗过敏性。本发明具有试验方法简便，成本低，检测结果以及检测灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及医疗评价技术领域，特别涉及一种药物抗过敏功效评价方法。

背景技术

肥大细胞是类过敏反应的主要效应细胞，激活的肥大细胞数量与过敏程度相关，激活的肥大细胞越多，过敏程度越严重。类胰蛋白酶(Tryptase)是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是含量最多的介质，经肥大细胞脱颗粒释放到细胞外，其在肥大细胞中的储存和表达有高度的选择性，可作为肥大细胞的激活和脱颗粒的标志。Tryptase通常只少量地分泌到体液中，当过敏引起肥大细胞脱颗粒时大量进入体液。类胰蛋白酶的急性过敏反应阳性反应和阴性反应的预测准确率分别为92.6％和54.3％，而且Tryptase的半衰期为2小时，因此，Tryptase的表达水平常作为类过敏反应的检测标志物之一。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题是提供一种基于模式生物的药物抗过敏功效评价方法。

本发明利用斑马鱼的肥大细胞在结构与功能上与哺乳类动物相似的原因，可参与机体的免疫反应和过敏反应。N-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯酰胺盐酸盐(BAPNA)是Tryptase特异性底物，可以检测斑马鱼体内的Tryptase表达水平。检测某物质诱导斑马鱼体内24小时内的Tryptase表达水平，可以定量分析此物质的致敏性。Compoud 48/80用于促进肥大细胞脱颗粒。

基于模式生物的药物抗过敏功效评价方法，包括如下步骤：

S1、用蒸馏水分别配制需要评价抗过敏功效的药物溶液和Compoud 48/80溶液；

S2、挑选发育正常的模式生物的受精卵分为药物处理组、模型对照组和溶剂对照组分别培养，向药物处理组加入药物溶液、模型对照组和溶剂对照组中加入等体积的蒸馏水，孵育1h；

S3、药物处理组、模型对照组中加入Compoud 48/80溶液，溶剂对照组加入等体积的蒸馏水，孵育1h；

S4、向药物处理组、模型对照组和溶剂对照组中分别取溶液置于不同的EP管中，同时各加入BAPNA溶液，孵育24h；

S5、使用酶标仪检测各组的OD405吸光值；

S6、计算Tryptase表达水平和抑制率：

S7、统计学处理结果以±SE表示，以溶剂对照组作为标准，比较各组Tryptase的表达水平和抑制率，确定样品的抗过敏性。

作为优选地，所述步骤S1中，药物为色甘酸钠药物或酮替芬药物。

作为优选地，所述步骤S2中，模式生物为斑马鱼。通常使用的实验动物有小鼠、大鼠和家兔等，但哺乳动物存在周期长、繁殖慢、费用高及操作复杂等问题，故不能满足对大量外源物质评价的需求。而斑马鱼个体小，占空间少，易于饲养，成本较低，繁殖能力强，全年产卵且数量大，可进行大规模的筛选实验。本发明是通过测定斑马鱼的肥大细胞脱颗粒释放到体外水溶液中的类胰蛋白酶获知结果，而小鼠、大鼠和家兔等哺乳动物的肥大细胞脱颗粒时，无法提取释放到体外的类胰蛋白酶。