[发明专利]一种呕吐毒素的化学发光检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括吖啶取代物标记的呕吐毒素抗体、偶联有呕吐毒素抗原的磁微粒、校准品溶液、清洗液、化学发光预激发液A和化学发光激发液B。

2.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶取代物为吖啶酯或吖啶磺酰胺。

3.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述呕吐毒素抗体由保藏编号为CCTCC NO：C201474的杂交瘤细胞株W5分泌得到。

4.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述校准品溶液为采用含有0.5-5.0％BSA和0.1-0.5％PC300的Tris-HCl缓冲液配制而成的浓度为0μg/L、0.01μg/L、0.05μg/L、0.25μg/L、1.25μg/L、6.25μg/L的呕吐毒素溶液。

5.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光预激发液A为含有双氧水的硝酸溶液，其中，双氧水质量浓度为1-3％，硝酸浓度为为0.5-2mol/L。

6.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光激发液B为含有氢氧化钠的Triton X-100溶液，其中，氢氧化钠浓度为0.5-0.8mol/L，Triton X-100浓度为0.5-2mol/L。

7.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶取代物标记的呕吐毒素抗体通过如下方法制得：

(a)将呕吐毒素抗体置于透析袋中，并将透析袋置于标记缓冲液中进行透析，透析过程中标记缓冲液至少更换4次，最后一次透析过夜，所述标记缓冲液为pH8.0-11.0、浓度为0.05-0.50mol/L Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液；

(b)将吖啶取代物溶于无水二甲基甲酰胺中，得到浓度为10-20mmol/L吖啶取代物溶液；

(c)将透析后的呕吐毒素抗体置于离心管中，加入上述吖啶取代物溶液，使得吖啶取代物与呕吐毒素抗体的摩尔比为(10-50)∶1，随后加入标记缓冲液200μL，室温下反应1-2h，再加入10-20g/L赖氨酸100μL，继续反应10-30min；

(d)将上述反应后的溶液通过Sephadex G-50柱分离，再用pH6.3、0.1mol/L的PBS纯化缓冲液洗脱并收集吖啶取代物标记的呕吐毒素抗体，加入1％BSA保存。

8.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有呕吐毒素抗原的磁微粒由磁微粒直接与呕吐毒素抗原直接偶联制得，或由磁微粒与链霉亲和素偶联，再与生物素标记的呕吐毒素抗原结合制得。

9.根据权利要求8所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述呕吐毒素抗原与磁微粒直接偶联方法如下：

(a)将1-2mg羧基磁微粒置于离心管中，并加入200μL的0.2-0.3mol/L、pH5.0的MES缓冲液，混匀，置于磁力架上静置4-6min使磁微粒与液体分开，弃去上清，洗涤3次，再加入200μL的0.2-0.3mol/L、pH5.0的MES缓冲液，混匀；

(b)将呕吐毒素抗原25-50μg置入离心管中，室温孵育40-60min；

(c)再向离心管中加入10μL浓度为20-30mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，室温孵育3-5h；

(d)去上清，用含有0.05％Tween-20、pH5.0、浓度为10mmol/L的Tris-HCl缓冲液，洗涤2-4次；

(e)再采用含2-2.5％BSA、pH6.0、浓度为10mmol/L的Tris-HCl缓冲液进行封闭，反复封闭3-5次，每次10min，得到偶联由呕吐毒素抗原的磁微粒，并置于2-8℃保存。

10.根据权利要求1所述的呕吐毒素的化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述清洗液为含有氯化钠以及Tween-20的pH7.0-9.0、浓度为5-50mmol/L的Tris-HCl溶液，其中氯化钠浓度为0.05-0.50mol/L，Tween-20的浓度为0.01-0.25％。