[发明专利]一种通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法及其应用

权利要求书

1.一种通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将酵母细胞接入发酵培养基中乳化发酵培养：乳化发酵培养第3～6天每天添加橄榄油，得到乳化状菌液混合物；

(2)将步骤(1)得到的乳化状菌液混合物进行固液分离，将得到的液体进行破乳分离，得到类神经酰胺提取物和乳状水相；

(3)将步骤(2)得到的乳状水相进行萃取分离，得到类神经酰胺提取物；

(4)将步骤(2)和步骤(3)得到的类神经酰胺提取物合并，干燥，得到类神经酰胺提取物；

所述的酵母为假丝酵母(Candida antarctic)WHS112或蚜虫拟酵母(Pseudozymaaphidis)DSMZ70725；

所述的发酵培养基中含有橄榄油。

2.根据权利要求1所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的第3～6天每天添加橄榄油的添加量如下：第3天按29～31g/L发酵液体积计算、第4天按59～61g/L发酵液体积计算、第5天按89～91g发酵液体积计算、第6天按58～60g/L发酵液体积计算；其中，第3天的发酵液的体积为发酵培养基和接种的酵母细胞体积总和，第4-6天的发酵液的体积为发酵培养基、接种的酵母细胞体积和添加入橄榄油体积总和。

3.根据权利要求1所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述发酵培养基的组成成分按质量百分比计，如下：橄榄油5～15％，硝酸钠0.1～0.5％，硫酸镁0.01～0.05％，磷酸二氢钾0.01～0.05％，酵母提取物0.05～0.15％，余量为蒸馏水；进一步如下：橄榄油10.0％，硝酸钠0.3％，硫酸镁0.03％，磷酸二氢钾0.03％，酵母提取物0.1％，余量为蒸馏水。

4.根据权利要求3所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的酵母细胞通过如下步骤制备得到：将保存的酵母细胞活化，放大培养，得到二级种子培养液；

步骤(1)中所述的乳化发酵的条件如下：发酵培养基体积相当于发酵罐体积的40～60％，酵母细胞的接种量为发酵培养基体积的5～10％，温度为28～30℃，溶氧量为30％以上；

步骤(1)中所述的乳化发酵的时间为8天。

5.根据权利要求4所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

所述的活化的步骤如下：将保存的酵母细胞接种于种子培养基中，在26～30℃、180～220rpm的条件下培养至对数生长期或平台期，得到含活化的酵母细胞培养液；

所述的扩大培养的步骤为：将活化酵母细胞接种于种子培养基中，在26～30℃、180～220rpm的条件下培养至对数生长期或平台期，得到二级种子培养液；

所述的活化和所述的扩大培养中所用到的种子培养基的组成成分按质量百分比计，如下：蛋白胨0.2～0.8％，葡萄糖0.5～1.5％，酵母提取物0.1～0.5％，麦芽提取物0.1～0.5％，余量为蒸馏水；

所述的溶氧量是通过将空气流速控制1.5～2vvm或者搅拌速度控制100～180rpm维持。

6.根据权利要求1所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的固液分离的方式为离心或过滤；

步骤(2)中所述的破乳的方法为离心；

步骤(3)中所述的萃取分离的具体步骤如下：将乳状水相和有机溶剂混合，进行萃取，静置分层后取有机相，回收有机溶剂。

7.根据权利要求6所述的通过乳化发酵制备类神经酰胺的方法，其特征在于：

所述的固液分离的方式为离心时，离心的转速为5000～12000r/min；

所述的破乳的方法为离心时，离心的转速为10000～20000r/min。