[发明专利]B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒，所述间接ELISA检测试剂盒以B型诺维氏梭菌菌悬液为包被抗原；所述B型诺维氏梭菌菌悬液由如下方法制备而成：将B型诺维氏梭菌接种于培养基中进行増菌培养；将培养得到的B型诺维氏梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成B型诺维氏梭菌菌悬液。本发明的试剂盒以完整诺维氏梭菌菌体作为包被抗原，能够高敏感及高特异性的检测羊血清中是否含有诺维氏梭菌的抗体，并依此判断羊是否感染羊黑疫。本发明的检测结果特异性强，且重复性好，能够实现在羊发病后快速做出诊断并采取紧急治疗措施。

技术领域

本发明涉及诺维氏梭菌检测的技术领域，具体涉及一种羊B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

羊黑疫又称“传染性坏死性肝炎”，是由B型诺维氏梭菌引起的一种急性高度致死性传染病。诺维氏梭菌能引起人的气性坏疽、动物的恶性水肿、绵羊的大头病和绵羊、山羊、牛、马等的黑疫等疾病，发病急、死亡率高，是人畜共患病中危害较大的一类生物因素，是严重危害养殖业的重要疾病，给各国畜牧业发展带来巨大经济损失。对于羊黑疫的分析检测一直不被重视，但是临床和科研过程中都需要建立针对羊黑疫的快速检测方法，目前还未出现针对羊黑疫的快速检测方法，不利于科研工作和健康养殖工作的开展。

目前，对于该病的病原学诊断方法主要为病原菌的PCR、临床剖检观察其病理变化等方法，但这些方法基本不适用于患羊的活体诊断。患病羊血清中必然存在抗诺维氏梭菌抗体，因此，ELISA检测方法检测其抗体水平可有效反映羊只的感染情况。

目前，间接ELISA方法检测羊黑疫抗体的方法少之又少。在常见的间接ELISA方法检测抗体的方法中，所用的包被抗原包括原核表达蛋白、超声裂解的菌体蛋白。以原核表达的蛋白做包被抗原时，特异性较差，会与其他疫病阳性血清发生交叉反应。以超声裂解的菌体作为包被抗原时，不同批次裂解菌体所得结果差异较大，不能保证批次间的稳定性；且菌体裂解，释放内部蛋白，易出现假阳性检测结果。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒。本发明的试剂盒以完整诺维氏梭菌菌体作为包被抗原，能够高敏感及高特异性的检测羊血清中是否含有诺维氏梭菌的抗体，并依此判断羊是否感染羊黑疫。本发明的检测结果特异性强，且重复性好，能够实现在羊发病后快速做出诊断并采取紧急治疗措施。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒，所述间接ELISA检测试剂盒以B型诺维氏梭菌菌悬液为包被抗原。

优选的，所述B型诺维氏梭菌菌悬液由如下方法制备而成：

将B型诺维氏梭菌接种于増菌培养基中进行培养；将培养得到的B型诺维氏梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成B型诺维氏梭菌菌悬液。

更优选的，所述増菌培养基由如下方法制备而成：

将胰蛋白胨10g、酵母浸粉10g、磷酸钾5g、葡萄糖10g、牛肉粒12g溶解于1000mL蒸馏水中，120℃高温灭菌15min，配制成基础培养基；

将1g维生素K1溶于99ml无水乙醇中，过滤除菌，制备得到维生素K1溶液；

将0.5g血红素溶于1mol/L的氢氧化钠1mL中，加蒸馏水至100mL，121℃高压灭菌，制备得到血红素溶液，4℃保存备用；

向冷却至室温的基础培养基中无菌加入维生素K1溶液5mL、血红素溶液10mL，调节pH至7.8-8.4，即制备得到増菌培养基。

更优选的，所述培养条件为：在37℃厌氧环境下培养3d；所述厌氧环境的气体组成为：80％氮气、10％氢气、10％二氧化碳(均为体积百分比)。