[发明专利]一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测猪细小病毒7型的环介导等温扩增方法的引物组，包括一对外引物、一对内引物和一对环引物，其中所述一对外引物包括F3和B3；所述一对内引物包括FIP和BIP；所述一对环引物LF和LB；本发明进一步公开了一种包含上述引物组的试剂盒，该试剂盒包括所述引物组、等温扩增反应缓冲液、Bst 2.0WarmStart DNA聚合酶、dNTP Mix、MgSO₄、超纯水和荧光显色检测试剂。本发明提供一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒，本发明污染小，操作简便、快速、可用肉眼直接观察结果。具有特异性强、灵敏度高等优点，无需昂贵仪器设备，尤其便于基层使用。

技术领域

本发明属于动物传染病学检测领域，具体为一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒。

背景技术

猪细小病毒(PPV)是一种小型、无包膜的单链DNA病毒，属细小病毒科。目前除了经典的PPV(称为PPV1)外又陆续发现了一些新的细小病毒，迄今已鉴定出7种PPV基因型(PPV1-PPV7)。PPV7是最近发现的PPV基因型，2016年在美国首次报道。PPV7基因组4103bp，包括538bp的5'非编码区，2019bp的NS1基因、1410bp的衣壳蛋白基因和119bp的3'非编码区。

LAMP法是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60～65℃)、经一个步骤即可完成。扩增效率极高，可在15分～1小时内实现10⁹～10¹⁰倍的扩增。而且由于有着高度的特异性，只需根据扩增反应产物的有无即可对靶基因序列的存在与否作出判断。本标准加入SYBR Green I染料，即可通过观察颜色变化得知扩增产物的有无，判定结果。目前国内外均未见有用于检测猪细小病毒7型的LAMP引物组及试剂盒在猪细小病毒检测中的应用。为此，我们推出了一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决背景技术中涉及的技术问题，提供一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒。

本发明采用的技术方案如下：

一种检测猪细小病毒7型的环介导等温扩增方法的引物组，包括一对外引物、一对内引物和一对环引物，其中所述一对外引物包括F3和B3；所述一对内引物包括FIP和BIP；所述一对环引物LF和LB；所述引物组的序列见表1：

表1：该引物组序列

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一种包含上述引物组的试剂盒包括:所述引物组、等温扩增反应缓冲液、Bst2.0WarmStart DNA聚合酶、dNTP Mix、MgSO₄、超纯水和荧光显色检测试剂。

进一步，所述等温扩增反应缓冲液为10×等温扩增反应缓冲液，所述10×等温扩增反应缓冲液包括：200mM Tris-HCl，100mM(NH₄)₂SO4，500mM KCl，20mM MgSO₄，1％Tween-20。

进一步，所述Bst 2.0WarmStart DNA聚合酶浓度为8000U/ml。

进一步，所述dNTP Mix浓度为10mM；进一步，所述MgSO₄浓度为100mM。

进一步，所述的荧光显色检测试剂采用1000×SYBR Green Ⅰ染料，荧光试剂在反应后加入。

进一步，所述LAMP反应体系见表2：

表2：LAMP反应体系

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