[发明专利]一种磷酸修饰荧光团的核苷酸分子测序方法

权利要求书

1.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，其特征在于，

利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序；

所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号强度相比测序反应前有明显上升；

每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组至少包括两个反应液，每个反应液包含A、G、C、T核苷酸分子中的至少一种，或者每个反应液包含A、G、C、U核苷酸分子中的至少一种；

首先，将待测的核苷酸序列片段固定在反应室中，通入一套反应液组中的一个反应液；

检测、记录荧光信息；

每次通入一个反应液，将同一反应液组中的其它反应液依次通入，并且每次检测、记录荧光信息；

其中，所述反应液组中，至少有一个反应液包含两种或者三种不同的核苷酸分子；

所述测序中，使用酶将具有荧光切换性质的荧光团的核苷酸底物上面的荧光团释放，从而导致荧光切换。

2.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于，

进一步包括，利用清洗液清除残留的反应液以及荧光分子，然后进行下一轮测序反应。

3.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于，

在低温下进入反应液，然后加热到酶反应温度，再检测荧光信号。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

通入反应液之后，将反应室封闭，然后检测、记录荧光信息。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

通入反应液后，用油充满反应室外面的空间，从而将反应室隔离、封闭。

6.根据权利要求1-5任一项所述的测序方法，其特征在于，

所述的多磷酸的核苷酸底物分子指的是具有4-8个磷酸分子的核苷酸。

7.根据权利要求1-5任一项所述的测序方法，其特征在于，

所述修饰有荧光团的核苷酸底物分子，根据碱基的不同，可以用一种荧光基团标记，进行单色测序；也可以用不同的荧光团标记，进行多色测序。

8.根据权利要求1-5任一项所述的测序方法，其特征在于，

步骤使用酶将具有荧光切换性质的荧光团的核苷酸底物上面的荧光团释放中，所述的酶包括DNA聚合酶和碱式磷酸酶。

9.根据权利要求1-5任一项所述的测序方法，其特征在于，

所述的反应液中包含了所述酶，即将反应液通入待测的基因片段所在的反应区域的时候，其包含的酶将具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物上的荧光团释放。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，

所述的使用酶将具有荧光切换性质的荧光团的核苷酸底物上面的荧光团释放是指首先使用DNA聚合酶将多磷酸取代的荧光团释放，然后使用磷酸酶将取代多磷酸切除，从而释放荧光团。

11.一种高通量测序的方法，利用权利要求1-10任一项所述的方法进行测序，其特征在于，

测序反应在芯片上进行，芯片上有多个反应室，将待测的核苷酸序列片段固定在反应室内。