[发明专利]一种海洋蛭弧菌的长期保存方法

权利要求书

1.一种海洋蛭弧菌的长期保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备宿主菌海水悬液

制备SWYE液体培养基，将用于保存海洋蛭弧菌的宿主菌接种于SWYE液体培养基中，振荡培养至对数末期后对含有宿主菌的SWYE液体培养基进行离心，并用无菌海水漂洗两次后得到宿主菌培养菌，随后将宿主菌培养菌悬于无菌海水中制备宿主菌海水悬液，并调整宿主菌海水悬液中的菌液浓度，菌液浓度为10⁶cfu/mL或10⁷cfu/mL；其中，所述海洋蛭弧菌的宿主菌均为溶藻弧菌，所述海洋蛭弧菌为Halobacteriovorax属的菌种；

S2：制备海洋蛭弧菌海水悬液

制备菌液浓度为5×10⁸cfu/mL的用于培养海洋蛭弧菌的宿主菌海水悬液，将海洋蛭弧菌接种于上述宿主菌海水悬液中，30℃振荡培养至宿主菌被裂解完全且含有大量攻击期海洋蛭弧菌时，取培养液于1000g条件下离心10min后取上清液，用0.45μm滤膜过滤两次后再于12000g条件下离心20min，弃掉上清液，用无菌海水漂洗离心后的沉淀物，随后再于12000g条件下离心20min，随后将海洋蛭弧菌培养菌悬于无菌海水中制备海洋蛭弧菌海水悬液，并调整海洋蛭弧菌海水悬液的菌液浓度，菌液浓度为10⁸pfu/mL或3.33×10⁷pfu/mL或10⁷pfu/mL；

S3：菌种保存

将步骤S2中制备的海洋蛭弧菌海水悬液与步骤S1中制备的宿主菌海水悬液等体积混合在一起，向5mL无菌螺帽管内装入4mL上述混合液，并将装有混合液的无菌螺帽管置于20-30℃条件下保存。

2.根据权利要求1所述的一种海洋蛭弧菌的长期保存方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中的无菌海水的盐度均为25-35，pH均为7-9，并均经过过滤和灭菌处理。

3.根据权利要求2所述的一种海洋蛭弧菌的长期保存方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中的无菌海水的盐度均为29.8-30.2，pH均为7.8-8.2，并均经过过滤和灭菌处理。

4.根据权利要求1所述的一种海洋蛭弧菌的长期保存方法，其特征在于，步骤S3中的保存温度为20℃，选用的海洋蛭弧菌海水悬液的菌液浓度为3.33×10⁷pfu/mL，选用的宿主菌海水悬液的菌液浓度为10⁶cfu/mL。

5.根据权利要求1所述的一种海洋蛭弧菌的长期保存方法，其特征在于，步骤S3中的保存温度为20-30℃，选用的海洋蛭弧菌海水悬液的菌液浓度为10⁷pfu/mL，选用的宿主菌海水悬液的菌液浓度为10⁷cfu/mL。