[发明专利]一种KRAS基因突变位点的检测引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种能够同时检测7种KRAS基因突变的引物和探针组合物，所述KRAS基因突变包括在2号外显子第12和第13位的如下密码子突变点中的任一种或多种：G12S、G12R、G12C、G12D、G12A、G12V、G13D；所述引物是将所述突变点设计在引物序列3'端的第一位，并在3'端的第二位、第三位和/或第四位增加一个或多个碱基的错配，使野生型的序列不能与设计的引物序列结合，而突变型的序列能高效的扩增；优选地，所述的密码子突变对应的碱基突变依次为34G>A、34G>C、34G>T、35G>A、35G>C、35G>T、38G>A。

2.根据权利要求1所述的引物和探针组合物，所述的引物包括如下任一种或多种：

针对KRAS基因突变点G12S检测设计的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示；

针对KRAS基因突变点G12R检测设计的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

针对KRAS基因突变点G12C检测设计的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示；

针对KRAS基因突变点G12S、G12R、G12C检测设计的下游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

针对KRAS基因突变点G12D、G12A、G12V、G13D检测设计的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示；

针对KRAS基因突变点G12D检测设计的下游引物序列如SEQ ID NO.6所示；

针对KRAS基因突变点G12A检测设计的下游引物序列如SEQ ID NO.7所示；

针对KRAS基因突变点G12V检测设计的下游引物序列如SEQ ID NO.8所示；

针对KRAS基因突变点G13D检测设计的下游引物序列如SEQ ID NO.9所示；

所述探针包括如下任一种或多种：

针对KRAS基因突变点G12S、G12R、G12C检测设计的探针序列如SEQ ID NO.10所示；

针对KRAS基因突变点G12D、G12A、G12V、G13D检测设计的探针序列如SEQ ID NO.11所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物和探针组合物，所述引物和探针组合物还包括内参基因GAPDH的上、下游引物和探针，所述GAPDH的上游引物序列如SEQ ID NO.12所示，所述GAPDH的下游引物序列如SEQ ID NO.13所示，所述GAPDH的探针序列如SEQ ID NO.14所示。

4.权利要求1-3任一项所述的引物和探针组合物在制备检测KRAS基因突变的试剂盒中的应用，所述KRAS基因突变为肿瘤样本的KRAS基因突变，所述肿瘤包括肺癌、结直肠癌，所述样本包括粪便样本、人类的全血样本、血浆样本、组织样本、口腔样本、尿液样本、唾液样本、FFPE样本；作为优选地，所述肿瘤为结直肠癌；作为优选地，所述样本为粪便样本。