[发明专利]猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种针对猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。该试剂盒包被有单克隆抗体PDCoV‑N‑1A2的酶标板、阳性和阴性对照、HRP标记的检测抗体PDCoV‑N‑5C5、样品稀释液、显色液以及洗涤液。其中所述抗体PDCoV‑N‑1A2和PDCoV‑N‑5C5分别由杂交瘤细胞株PDCoV‑N‑1A2和PDCoV‑N‑1A2分泌。本发明的试剂盒以1A2为捕获抗体、以杂交5C5(HRP偶联)为检测抗体建立的双抗体夹心ELSIA方法可特异性的检测PDCoV N蛋白，为PDCoV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种针对猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。

背景技术

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)是一种新发现的冠状病毒，可引起猪、特别是新生仔猪腹泻，其引发的临床表现与已知的猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻非常相似，容易混淆，感染后可导致较高的发病率和死亡率，是近年来在多个国家和地区造成新生仔猪死亡的重要原因之一。PDCoV最早于2012年由香港学者首次发现(WooPC,et al.Discovery of seven novel Mammalian and avian coronaviruses in thegenus deltacoronavirus supports bat coronaviruses as the gene source ofalphacoronavirus and betacoronavirus and avian coronaviruses as the genesource of gammacoronavirus and deltacoronavirus.Journal of virology,2012,86(7):3995-4008.)，2014年在美国首次发生大规模流行(Li G,et al.Full-Length GenomeSequence of Porcine Deltacoronavirus Strain USA/IA/2014/8734.Genomeannouncements,2014,2(2)：e00278-14.)，随后在韩国，中国等地相继被检测到(Lee S,etal.Complete Genome Characterization of Korean Porcine Deltacoronavirus StrainKOR/KNU14-04/2014.Genome announcements,2014,2(6)：e01191-14.；Chen F,etal.2015.Full-length genome characterization of Chinese porcinedeltacoronavirus strain CH/SXD1/2015.Genome Announcements,3(5):e01284-15；)。目前，临床诊断PDCoV感染的病原学检测方法主要是RT-PCR、qRT-PCR等针对病毒核酸的检测技术，缺乏直接针对PDCoV抗原的免疫学相关方法。为了准确评估猪群中的PDCoV感染情况，亟需建立PDCoV抗原检测方法，配合已有的抗体检测方法，从抗原抗体两个方面进行综合评定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N蛋白的双抗体夹心ELISA试剂盒，该试剂盒可用于快速准确地检测PDCoVN蛋白。

为了解决上述技术问题，本发明使用一种已公开的高纯度、可溶性的猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白PDCoV-N-His作为免疫原和检测原(CN 109880843 A)，制备抗猪德尔塔冠状病毒N蛋白的单克隆抗体，并从获得的单克隆抗体中优选出其中两株(5C5和1A2)建立了检测PDCoV N蛋白的双抗体夹心ELSIA方法。