[发明专利]一种外泌体过滤提取装置及外泌体提取方法

说明书

本发明提出一种外泌体过滤提取装置及外泌体提取方法，包括外离心管、内离心管、第一滤膜和第二滤膜；内离心管置于外离心管内腔；内离心管的上端面插设有注入管，注入管穿过外离心管的上端面，实现内离心管的内腔与装置外界相连通；内离心管的下端面设有排出口；多张孔径大小不同的第一滤膜等间距布置于内离心管的内腔，并且多张第一滤膜按照孔径由大到小的顺序，以注入管至排出口的方向依次设于内离心管的内腔；第二滤膜架设于内离心管的外侧壁与外离心管的内侧壁之间，并且第二滤膜围绕内离心管的外侧壁一周设置；外离心管的底端设有取料口，以提出一种保证无菌环境并且使得外泌体过滤提取简单易操作的外泌体过滤提取装置及外泌体提取方法。

技术领域

本发明涉及外泌体提取技术领域，尤其涉及一种外泌体过滤提取装置及外泌体提取方法。

背景技术

细胞外囊泡(EVs)是一种高度保守的细胞间通讯系统，通过该系统，细胞可以以脂质、蛋白质或核酸的形式进行信息交换。EVs最初被发现参与骨矿化以及血小板功能，被称为“血小板粉尘”。鉴于它们极其广泛的生物学功能及其在细胞间穿梭大分子的能力，EVs为开发一类新的治疗方法提供了独特的平台。

外泌体(Exos)是EVs的一个亚型，存在于所有的体液中，是一种通过多泡内体途径从人体内所有细胞内部释放的小囊泡(30nm-150nm)。外泌体是EVs中最有用于治疗前景的类型。

外泌体的来源常用的有体外培养的细胞和来源于人的体液。来源于细胞的外泌体最大的问题就是，用他人的细胞涉及到伦理；用自己的细胞培养周期太长，不确定因素太多。来源于人的体液的外泌体就可以很好的规避这些问题，来源于患者自己的体液，经过分离和处理提取外泌体，再用于患者自身，就不存在伦理方面的问题。

体液中最常用的是血液。血清外泌体，不仅含有血液中的外泌体，还含有血小板来源的外泌体，具有很好的临床前景。各种体液来源的外泌体，包括血清外泌体和来自富血小板血浆的外泌体，已有相当多的文献证实它们促进组织修复和组织保护功能。我们前期的研究中也发现，这些体液来源的外泌体具有很好的促进组织修复，预防各种原因造成的组织器官损伤的功能，具有很好的临床应用前景。

但是传统的外泌体的提取方法在临床中使用是具有不足点的。现在大部分的外泌体提取方法主要是在实验室中使用的。需要大型的仪器，需要无菌的操作间，需要经过专业培训的工作人员进行操作。如果外泌体投入临床使用，必须要简化流程，还有降低准入门槛，不可能匹配如此多的经过专业训练的人才来做外泌体的临床上使用的提取工作。

总的来说，我们需要的在临床上使用的产品必须具备两个特征：容易操作和保持无菌。

在实验室研究中，比较公认且操作相对简单的是超滤法。但即使是超滤法，在实验室中，无菌是通过专业技术人员在超净台中，使用移液器、无菌枪头和各种无菌耗材实现的，这不仅对硬件条件有要求，对相关操作人员的技术也有要求。为了能够在临床推广，我们要尽量避免使用移液器等设备，减少操作，在一根管子中完成绝大部分的操作，不仅可以保证在临床运用中保持无菌，同时还能降低学习成本。相关操作人员仅需短期的培训，便可掌握无菌获取治疗用外泌体的技能。

发明内容

本发明的目的在于提出一种保证无菌环境并且使得外泌体过滤提取简单易操作的外泌体过滤提取装置及外泌体提取方法。

为达到上述目的，本发明提出一种外泌体过滤提取装置，包括外离心管、内离心管、第一滤膜和第二滤膜；所述内离心管置于所述外离心管内腔；所述内离心管的上端面插设有注入管，所述注入管穿过所述外离心管的上端面，实现所述内离心管的内腔与装置外界相连通；所述内离心管的下端面设有排出口；

多张孔径大小不同的所述第一滤膜等间距布置于所述内离心管的内腔，并且多张所述第一滤膜按照孔径由大到小的顺序，以所述注入管至所述排出口的方向依次设于所述内离心管的内腔；