[发明专利]基于枝状DNA的靶标触发信号级联放大的核酸检测方法

说明书

本发明公开了基于枝状DNA的靶标触发信号级联放大的核酸检测方法，步骤为：制备一种n枝状DNA和一种不同于n枝状的粘性末端的m枝状DNA，将5'端修饰有巯基基团的核酸探针分子通过巯基连接在金基底表面，加入待测靶标核酸分子，反应，至生物传感器检测信号稳定，加入n枝状DNA，反应，至生物传感器检测信号稳定，加入待测靶标核酸分子，反应，至生物传感器检测信号稳定，加入m枝状DNA，反应，至生物传感器检测信号稳定；直至加入一种n枝状DNA或m枝状DNA后生物传感器检测信号不再波动，最终显示出级联放大的待测靶标核酸分子检测信号。本发明操作简便，无需酶的参与，无需分子标记，成本低廉，适用范围广泛。

技术领域

本发明属于核酸分子检测的技术领域，涉及基于枝状DNA的靶标触发信号级联放大的核酸检测方法，属于一种定性的核酸检测方法。

背景技术

核酸的检测和分析对疾病的诊断和治疗起着非常重要的作用，如何快速精准地检测核酸序列是现代医学亟需解决的问题，也是个性化医疗的发展趋势，现主要检测的目标分为细菌和病毒病原体、癌症标志物、遗传性疾病等[1]。癌症是全球第二大致死病因[2]，很多病人由于未及时发现疾病，而错过了最佳的诊断和治疗时间，因此癌症的早期诊断对于人类健康和安全来说是至关重要的[3]。核酸可以作为一种肿瘤标志物，比如循环肿瘤DNA(ctDNA)是从肿瘤细胞上脱落下来的游离在外周血部位的单碱基突变DNA[4]，携带有肿瘤细胞特异性的遗传信息，相对于正常人来说，它在癌症病人的血清中含量较高，若能在早期癌症患者的体内及时检出ctDNA，则会在很大程度上提高癌症治愈的几率。细菌或病毒病原体的侵入会造成人体受到感染，当病原体DNA发生核酸突变时，可能会使得病原体具备抗生素耐药性[5]，因此可通过检测病原体DNA来判断患者所感染的疾病。当核酸变异发生在基因组编码区时，可能会改变氨基酸序列和蛋白的功能，进而造成人体遗传性疾病的发生，因此对基因核酸的检测可预知遗传性疾病发生的概率。然而对于临床样品来说，核酸的浓度是很低的，比如ctDNA的浓度在μg/L和ng/L之间，病原体DNA的浓度处于pg/L的级别[6]，因此如何在实际样品中实现高灵敏度、高精度的核酸检测仍然是现存的难题之一。