[发明专利]磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法

说明书

本发明涉及整体柱制备技术领域，尤其涉及一种磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法。磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法，包括步骤：(a)将磷酸化丝氨酸和四丁基氢氧化铵以及甲醇和水混合，反应得到产物；(b)在密封的反应容器内以该反应产物为模板化合物，加入甲醇、功能单体、交联剂和引发剂进行水相原位聚合反应，反应完成后洗涤，得到磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱。得到的磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱能够实现对磷酸化丝氨酸的特异性吸附。

技术领域

本发明涉及整体柱制备技术领域，尤其涉及一种磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法。

背景技术

氨基酸的磷酸化在许多生物化学过程中起着关键性的调节作用。磷酸化丝氨酸(P-Ser)来源于磷酸化蛋白质或细胞磷脂的分解，其含量的增加与疾病的严重程度有关，虽然，目前无法量化P-Ser和疾病的关系，但研究表明，P-Ser与肝肾功能不全、癌症等疾病相关，P-Ser水平异常通常预示着疾病的存在，所以P-Ser的分析检测有着重要的医学意义。质谱(MS)化学信息丰富、可以快速和多组分分析，是生物样品分析的有效技术，但是生物样品基质复杂，高丰度非磷酸化氨基酸的干扰大，P-Ser含量低，而且P-Ser质谱分析时的电离效率很低。所以，建立复杂生物样品中P-Ser有效分离和富集的样品前处理方法是质谱分析的关键步骤。

发明内容

为了解决以上问题，本发明的目的是提供一种磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法，能够对磷酸化丝氨酸的特异性吸附，从而，实现对磷酸化丝氨酸的有效分离富集。

以下磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱检测猪肝样品中磷酸化丝氨酸含量的方法简称为SPME-LC-MS/MS；液相色谱-串联质谱简称HPLC-MS/MS；固相微萃取简称SPME。

为实现上述目的，本发明所设计的磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱的制备方法，包括步骤：

(a)将磷酸化丝氨酸和四丁基氢氧化铵的甲醇溶液以及甲醇和水混合反应得到反应产物；

(b)以反应产物为模板化合物，加入甲醇、功能单体、交联剂和引发剂进行水相原位聚合反应，经在密封的反应容器内聚合、洗涤后得到磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱。

与现有的分子印迹聚合物整体微柱的制备方法相比，本发明首先利用四丁基氢氧化铵(TBAOH)增加P-Ser在有机溶剂中的溶解性，然后与功能单体进行水相原位聚合反应，经洗涤后得到对P-Ser具有特异性吸附功能的磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱。因为水相聚合制备整体微柱，使得该材料应用于SPME中的水溶液上样时，不易溶胀，使用寿命长。

作为优选方案，所述功能单体为丙烯酰胺；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈。

作为优选方案，所述步骤(a)的具体过程为，取1.0～1.2mmol的磷酸化丝氨酸和0.5～1.0mol/L的四丁基氢氧化铵的甲醇溶液2～3ml混合均匀后，加入到4～6ml的甲醇中，搅拌均匀后再滴加1～2ml水得到反应产物。

作为优选方案，所述步骤(b)中，模板分子200～300μL，甲醇200～300μL，丙烯酰胺8～9mg，乙二醇二甲基丙烯酸酯100～110μL，偶氮二异丁腈4～6mg。

作为优选方案，所述反应容器为移液枪枪头。即在移液枪小枪头中制备整体微柱。

一种利用磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱检测样品中磷酸化丝氨酸含量的方法，包括步骤：将样品溶液注入磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱中，磷酸化丝氨酸被选择性吸附于磷酸化丝氨酸印迹聚合物整体微柱后，从整体微柱中洗脱磷酸化丝氨酸，得到洗脱液，最后利用HPLC-MS/MS检测分析洗脱液中磷酸化丝氨酸的含量。