[发明专利]一种生物抑尘剂的绿色合成方法

权利要求书

1.一种生物抑尘剂的绿色合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、菌种活化：向枯草芽孢杆菌冻干物中加入活化标准NB培养液，并吹打致形成NB菌悬液，取菌悬液接种活化NA平板，涂布均匀，37℃恒温培养，待着菌NA平板长出淡粉色枯草芽孢杆菌活菌菌落完成活化；

b、菌种扩大培养：筛选着菌NA平板上特征明显的淡粉色不透明粗糙状的枯草芽孢杆菌活菌菌落，刮取枯草芽孢杆菌活菌菌丝并转种至标准LB培养液中，振荡，至标准LB培养液呈浅绿色，标准LB培养液中的菌株在指定参数下摇床培养；

c、菌种发酵培养：完成扩大培养的枯草芽孢杆菌菌种大量存在于种子液中，形成浑浊的着菌LB菌悬液，吸取着菌LB菌悬液作为LB菌悬接种液转种至标准Landy培养液中，振荡摇匀，摇床培养，发酵完成后形成浑浊的着菌Landy发酵液，酸化沉淀，重悬，抽提，形成含表面活性素分子的提取液，超声萃取，减压蒸发后即可得到有一定纯度的生物抑尘剂。

2.根据权利要求1所述的生物抑尘剂的绿色合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、菌种活化：实验所需枯草芽孢杆菌，未使用时其冻干物置于-10℃干燥环境冷冻保存（39），使用前4℃解冻，酒精灯微灼安瓿瓶（1）连接处至通红，滴无菌水致其破裂，316不锈钢平头镊子（2）打管（40）连接处，2 ml一次性注射器（3）向枯草芽孢杆菌冻干物（25）送液（41）500 μl活化标准NB培养液（26）并吹打致形成NB菌悬液（27），取菌悬液（42）200 μl NB菌悬接种液（28）接种（43）活化NA平板（30），玻璃涂布器（5）涂布（44）均匀，置于恒温培养箱（6）金属盛物架（11）上，打开电源（15）、功能设置按钮（13）使数显面板（12）显示设置温度、调节温度调节按钮（14）至37℃，打开加热开关（16），37℃恒温培养（45）12 h，待着菌NA平板（30）长出淡粉色枯草芽孢杆菌活菌菌落（31）完成活化；

b、菌种扩大培养：筛选着菌NA平板（30）上特征明显的淡粉色不透明粗糙状的枯草芽孢杆菌活菌菌落（31），无菌塑料接种环（7）刮取NA着菌平板（30）枯草芽孢杆菌活菌菌丝并转种（46）至装有标准LB培养液（32）的250 ml三角瓶（8），振荡，至标准LB培养液（32）呈浅绿色，硅胶塞封住250 ml三角瓶（8）瓶口，打开预热后装有温水的水浴式恒温旋转-振荡摇床（9）的电源开关（18），调节控温旋钮（21）至37.0℃并在数显面板（17）显示，打开加热开关（19），将装有着菌标准LB培养液（32）的250 ml三角瓶（8）固定在水浴式恒温旋转-振荡摇床（9）的金属弹簧式固定架（23）上，打开旋转开关（20），转动调速旋钮（22）至180 r/min并在数显面板（17）显示，旋转壁（24）带动250 ml三角瓶（8）旋转，标准LB培养液（32）中的菌株在指定参数下摇床（47）培养；

c、菌种发酵培养：完成扩大培养的枯草芽孢杆菌菌种大量存在于种子液中，形成浑浊的着菌LB菌悬液（33），2 ml一次性注射器（3）吸取着菌LB菌悬液（33）1300 μl 作为LB菌悬接种液（34）转种（48）至装有标准Landy培养液（35）的250 ml三角瓶（8），振荡摇匀，硅胶塞封住250 ml三角瓶（8）瓶口，水浴式恒温旋转-振荡摇床（9）中摇床（49）培养，发酵完成后形成浑浊的着菌Landy发酵液（36），酸化沉淀，重悬，甲醇抽提（50），形成含表面活性素分子（38）的提取液（37），超声萃取，减压蒸发后即可得到有一定纯度的生物抑尘剂。