[发明专利]一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法在审
| 申请号： | 201910676954.7 | 申请日： | 2019-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN110484450A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 陶建平;王乐乐;刘丹丹;苏丁泽阳;高阳;候照峰;宿世杰;许金俊 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N1/06 | 分类号： | C12N1/06;C12N1/10;C12R1/90 |
| 代理公司： | 32224 南京纵横知识产权代理有限公司 | 代理人： | 薛海霞;董建林<国际申请>=<国际公布> |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 卵囊壁 耳球 孢子化卵囊 蔗糖 破碎液 蛋白结构 分离纯化 快速分离 试剂配制 梯度离心 分离液 回收量 卵囊 制备 研究 | ||
1.一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，在灭菌的离心管底部加入1.1 M蔗糖分离液，离心管上部缓慢加入0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液，离心得到沉淀物，所得沉淀物经PBS缓冲液洗涤若干次，离心，得到纯化的艾美耳球虫卵囊壁。
2.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，所述的PBS缓冲液的具体组成为：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，pH7.4。
3.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，加入0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液后，离心条件为：3000-3200 g，15-20 min。
4.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，1.1 M蔗糖分离液、0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液的体积比为1:（1.5-3）。
5.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液的制备方法是：将纯化后的艾美耳球虫未孢子化卵囊用PBS缓冲液重悬后，加入至含有直径≤106 μm、经过酸处理的玻璃珠的管中，在涡旋混合仪上涡旋，涡旋方式为：涡旋1 min，间隔30 s，共涡旋15 次；期间用显微镜镜检卵囊破碎程度，确保卵囊破碎率达80%以上，吸取卵囊壁破碎液至管中，2500-3000 g离心5-7 min，收集沉淀物；用0.5 M蔗糖溶液重悬沉淀物，制备成0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液。
6.根据权利要求5所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，0.5 M蔗糖溶液的配制方法是：称取17.1g蔗糖，用蒸馏水定容至100 mL，充分搅拌溶解，115℃，高压灭菌15 min。
7.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，1.1 M蔗糖分离液的配制方法是：称取37.62 g蔗糖，用蒸馏水定容至100 mL，充分搅拌溶解，115℃高压灭菌15 min。
8.根据权利要求1所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，加入的0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液位于1.1 M蔗糖分离液的上方，且加入0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液时不扰动1.1 M蔗糖分离液的液面。
9.根据权利要求5所述的一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法，其特征在于，将纯化后的艾美耳球虫未孢子化卵囊用PBS缓冲液重悬的步骤中，PBS缓冲液的具体组成为：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4，pH 7.4。
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