[发明专利]采用一测多评法测定山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量的方法

权利要求书

1.采用一测多评法测定山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）对照品溶液的制备：精密称量绿原酸对照品11.59mg，咖啡酸对照品6.72mg、木犀草苷对照品13.60mg，分别加入25mL容量瓶中，加适量甲醇稀释至刻度，超声使其溶解，摇匀，精密量取上述绿原酸溶液1.5mL、咖啡酸溶液1.5mL和木犀草苷溶液6.0mL，置同一10mL容量瓶中并用甲醇定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液，混合对照品溶液每1mL溶液中含绿原酸69.54μg，咖啡酸40.32μg，木犀草苷326.4μg；

（2）供试品溶液的制备：取山苦荬药材粉末2g，置于100mL锥形瓶中，加入体积浓度为70%的甲醇30mL，称定重量，超声提取60min，温度30℃，频率70kHz，放冷，用体积浓度为70%的甲醇补足减失的重量，过滤，取续滤液过微孔滤膜0.45µm，即得；

（3）色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：CAPCELLPAK TYPE MGⅡSIZE -C₁₈；体积流量为1.0ml·min^-1；检测波长为330nm；柱温为25℃；进样量为5µL； 流动相采用甲醇-0.2%磷酸水溶液进行梯度洗脱，洗脱程序见表1，理论塔板数按绿原酸峰计算不低于5000；

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µL,注入液相色谱仪，在上述系统适应性的色谱条件下测定，采用内标法计算，供试品溶液的特征图谱中呈现绿原酸、咖啡酸和木犀草苷的峰值，以绿原酸为内参物，计算绿原酸与咖啡酸和木犀草苷的相对校正因子，通过相对校正因子计算山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量；

所述的山苦荬的拉丁学名为：Ixeridium chinense (Thunb .) Tzvel .；

所述的相对校正因子的计算方法为：分别吸取步骤（1）制备得到的混合对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 mL，分别置2.0 mL量瓶中，加体积浓度为70%的甲醇定容至刻度，摇匀，制成不同浓度的系列混合对照品溶液，按色谱条件测定，分别进样5μL，以绿原酸为内标，测定山苦荬中咖啡酸、木犀草苷的峰面积，按照相对校正因子计算公式fac=f a/fc=（Aa /Ca）/（Ac /Cc），计算常咖啡酸、木犀草苷的相对校正因子fac，式中用对照品来计算，Aa为内参物绿原酸的峰面积，Ca为内参物绿原酸的浓度， Ac为某待测成分峰面积； Cc为某待测成分浓度；相对校正因子fac为各实验所得数据的平均值。