[发明专利]同时检测多种细菌及支原体的多重PCR检测方法及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种同时检测多种细菌及支原体的引物探针组合。本发明还提供了一种同时检测多种细菌及支原体的多重PCR检测方法，应用该方法能同时检测多种细菌及支原体，实现多重检测，灵敏度高，快捷方便，可实现对样本进行批量检测。本发明还提供了一种同时检测多种细菌及支原体的试剂盒及其应用。解决了临床上常见易感染的病原微生物检测的诸多技术问题。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种同时检测多种细菌及支原体的多重PCR 检测方法及其应用。

背景技术

目前临床上检测细菌常用的方法有细菌培养、PCR法、一代测序和二代测序法。细菌培养是临床上检测细菌的金标准，但该方法需要进行药敏实验，通常需要1-3天才能得到最终检测结果，且不能同时处理批量样本。故该方法检测成本高，周期长，操作繁琐，难以满足临床需求。PCR法可在短时间内使的定的核酸序列拷贝数几何级增加，其灵敏度和特异性高，但其检测的假阳性率也很高，易受样品中其它成分的干扰出现假阴性。一代测序法检测细菌时间长，且低拷贝的细菌检测不到。尽管二代测序检测在诊断罕见病原体方面展现了优于传统方法的巨大实力，但对于常见的结核分枝杆菌、隐球菌等病原体，其灵敏度并不强于传统方法。对于这些常见病原体，经常是传统方法检测不到，二代测序也检测不到；而即使传统方法检测到这些病原体，二代测序仍然可能检测不到或只检测到极少量特异的片段，难以确定其准确性，且成本高，周期长。

鉴于上述描述，亟待有灵敏度高，特异性好，实验操作简单，且耗时短的同时检测多种细菌及支原体的检测方法出现。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测多种细菌及支原体的引物探针组合。

本发明的目的之二在于提供一种同时检测多种细菌及支原体的多重PCR检测方法，应用该方法能同时检测18种病原微生物，实现多重检测，灵敏度高，快捷方便，可实现对样本进行批量检测。

本发明的目的之三在于提供一种同时检测多种细菌及支原体的试剂盒及其应用。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种同时检测多种细菌及支原体的引物探针组合，所述引物探针组合包括：

1)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对1和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示的探针1；

2)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对2和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示的探针2；

3)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物对3和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示的探针3；

4)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物对4和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.36所示的探针4；

5)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的引物对5和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示的探针5；

6)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物对6和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示的探针6；

7)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的引物对7和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.39所示的探针7；

8)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的引物对8和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示的探针8；

9)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的引物对9和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.41所示的探针9；